FoxC1在鼻咽癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)及其與EMT相關(guān)分子標(biāo)志物關(guān)系的初步研究.pdf

1、目的：檢測鼻咽癌組織和細(xì)胞中FoxC1的表達(dá)情況。初步探討沉默F(xiàn)oxC1基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞CNE2生物學(xué)行為的影響。初步分析FoxC1與EMT相關(guān)分子標(biāo)志物相關(guān)性。
　　方法：⑴采用組織芯片及免疫組化技術(shù)檢測93例鼻咽癌組織標(biāo)本和33例慢性鼻咽炎性組織標(biāo)本中FoxC1的表達(dá)。⑵采用Western blot法檢測FoxC1在鼻咽癌細(xì)胞株6-10B、5-8F、CNE1、CNE2和永生化鼻咽上皮細(xì)胞株NP69中的表達(dá)情況，篩選出FoxC1

2、表達(dá)最高的細(xì)胞株。⑶通過FoxC1siRNA沉默鼻咽癌細(xì)胞CNE2中FoxC1的表達(dá)，采用Western blot法檢測FoxC1沉默效果。⑷采用MTT法、DAPI細(xì)胞核染色法檢測FoxC1沉默后鼻咽癌細(xì)胞CNE2體外增殖能力以及凋亡的變化;利用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測FoxC1沉默后鼻咽癌細(xì)胞CNE2體外遷移和侵襲能力的變化。⑸采用免疫組化技術(shù)檢測上述93例鼻咽癌組織標(biāo)本中EMT相關(guān)分子標(biāo)志物Vimentin、Fibronect

3、in、N-cadherin、E-cadherin和β-Catenin的表達(dá)，采用Western blot法檢測FoxC1沉默后鼻咽癌細(xì)胞CNE2中EMT相關(guān)分子標(biāo)志物Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin和β-Catenin的變化。
　　結(jié)果：①FoxC1在93例鼻咽癌組織中有40(43.0％)例高表達(dá)，明顯高于FoxC1在33例慢性鼻咽炎性組織中4(12.1％)例高表達(dá)(P＜0.01

4、)。FoxC1的表達(dá)與鼻咽癌患者腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及臨床分期存在相關(guān)性。②FoxC1在永生化鼻咽上皮細(xì)胞NP69中表達(dá)最低，高轉(zhuǎn)移潛能鼻咽癌細(xì)胞5-8F高于低轉(zhuǎn)移潛能鼻咽癌細(xì)胞6-10B，低分化鼻咽癌細(xì)胞CNE2高于高分化鼻咽癌細(xì)胞CNE1。對五組細(xì)胞FoxC1表達(dá)情況進(jìn)行兩兩比較，發(fā)現(xiàn)5-8F、6-10B、CNE2、CNE1細(xì)胞的FoxC1表達(dá)水平與NP69細(xì)胞相比均顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P5-8f，NP69＜0.01，P6

5、-10B,NP69＜0.01，PCNE2, NP69＜0.01，PCNE1，NP69＜0.01)。鼻咽癌細(xì)胞株中，在5-8F細(xì)胞中的表達(dá)高于在6-10B細(xì)胞中的表達(dá)(P＜0.01)，在CNE2細(xì)胞中的表達(dá)高于在CNE1細(xì)胞中的表達(dá)(P＜0.01)。③經(jīng)Western blot檢測，siFoxC1-1657組能顯著降低鼻咽癌細(xì)胞CNE2中FoxC1的表達(dá)。④經(jīng)siRNA處理后FoxC1沉默的實(shí)驗(yàn)組CNE2細(xì)胞與對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對照組CNE2細(xì)胞

6、相比，細(xì)胞增殖抑制率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。鏡下觀察FoxC1沉默的實(shí)驗(yàn)組CNE2細(xì)胞的細(xì)胞核較陰性及空白對照組未見明顯增多的凋亡改變。FoxC1沉默的實(shí)驗(yàn)組CNE2細(xì)胞在體外遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)中到達(dá)下室的細(xì)胞數(shù)量均明顯少于空白對照組(Pmigration＜0.01，Pinvasion＜0.01)。⑤在40例高表達(dá)FoxC1的鼻咽癌組織中，Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的高表達(dá)率分別為29/40(7

7、2.5％)、25/40(62.5％)、39/40(97.5％)，高于在53例FoxC1低表達(dá)的鼻咽癌組織中Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的高表達(dá)率22/53(41.5％)、20/53(37.7％)、42/53(79.3％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PVimentin＜0.01，PFibroncctin＜0.05，PN-cadherin＜0.05）;E-cadherin和β-Catenin在高表達(dá)FoxC1的鼻咽

8、癌組織中高表達(dá)率分別為26/40(65.0％)、24/40(60.0％)，在FoxC1低表達(dá)的鼻咽癌組織中的高表達(dá)率為34/53(64.2％)、39/53(73.6％)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PE-cadherin＞0.05，Pβ-Catenin＞0.05）。在經(jīng)siRNA沉默F(xiàn)oxC1的實(shí)驗(yàn)組CNE2細(xì)胞中，Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的表達(dá)較空白對照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PVimentin＜0.01

9、，PFibronectin＜0.01，PN-cadherin＜0.01）;E-cadherin和β-Catenin的表達(dá)較對照組變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PE-cadherin＞0.05,Pβ-Catenin＞0.05)。
　　結(jié)論：FoxC1在鼻咽癌組織和細(xì)胞中高表達(dá)以及與鼻咽癌患者腫瘤的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，其可能在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。本研究所設(shè)計(jì)的針對人FoxC1的siRNA能夠有效的下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞CNE2中Fo

10、xC1的表達(dá)，為進(jìn)一步研究FoxC1在鼻咽癌細(xì)胞中的作用提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。通過siRNA沉默F(xiàn)oxC1能降低鼻咽癌細(xì)胞CNE2的體外侵襲和遷移能力，其可能參與了鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。在組織中FoxC1的高表達(dá)與Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的高表達(dá)相關(guān)，在FoxC1沉默的CNE2細(xì)胞中Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的表達(dá)下調(diào)，其可能通過調(diào)控間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)，進(jìn)而參與鼻咽癌上皮—