原發(fā)性高血壓患者血清FGF21水平檢測(cè)和FGF21基因載體的構(gòu)建及表達(dá).pdf

1、目的：
　　1.檢測(cè)原發(fā)性高血壓患者血清成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21(FGF21)水平，初步探討FGF21與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性。
　　2.構(gòu)建人和小鼠FGF21表達(dá)載體，并在大腸桿菌中表達(dá)，純化后獲得小鼠和人的FGF21融合蛋白。為后期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)作準(zhǔn)備。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象分為三組，原發(fā)性高血壓伴動(dòng)脈粥樣硬化組（n=10）、原發(fā)性高血壓非動(dòng)脈粥樣硬化組（n=20），正常對(duì)照組（n=30）。采用酶法測(cè)定血清甘油

2、三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平，血清FGF21、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）水平采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定。
　　2.分別從人和小鼠肝臟提取總RNA后，經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增獲得目的片段，構(gòu)建其T載體進(jìn)行保存。以T載體為模板，擴(kuò)增FGF21 mat-peptide，連接至pGEX-4T-3、 pET-28a(+)表達(dá)載體中，構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-3-MF

3、GF21、pET-28a(+)-MFGF21、pGEX-4T-3-HFGF21、 pET-28a(+)-HFGF21。將各重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌菌株BL21（DE3）中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳以鑒定是否為可溶性表達(dá)，采用親和層析法純化各表達(dá)產(chǎn)物后，進(jìn)行Western blotting鑒定。
　　結(jié)果：
　　1.原發(fā)性高血壓伴動(dòng)脈粥樣硬化組、原發(fā)性高血壓非動(dòng)脈粥樣硬化組血清FGF21、ox-LDL、

4、TG水平均明顯高于對(duì)照組（P<0.05）；線性相關(guān)分析顯示血清FGF21水平與ox-LDL、TG均呈正相關(guān)。
　　2.成功構(gòu)建重組質(zhì)粒 pGEX-4T-3-MFGF21、 pET-28a(+)-MFGF21、pGEX-4T-3-HFGF21、 pET-28a(+)-HFGF21?？扇苄员磉_(dá)后成功純化出GST-MFGF21、his-MFGF21、GST-HFGF21、his-HFGF21，經(jīng)Western-blotting鑒定為目的