FTY720聯(lián)合共刺激分子單克隆抗體誘導(dǎo)延長(zhǎng)同種異基因抗原致敏小鼠心臟移植的存活及機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的:臨床上器官功能衰竭終末期需要進(jìn)行器官移植的患者，實(shí)際上大部分由于受到多次感染、妊娠、多次輸血、透析或者已行組織/器官移植，使得體內(nèi)存在不同水平的抗原特異性或者非特異性記憶性T細(xì)胞(Tm)，對(duì)二次移植可產(chǎn)生超急性排斥反應(yīng)。皮膚預(yù)致敏小鼠可以模擬人體內(nèi)的這種Tm存在的狀態(tài)，嘗試在皮膚預(yù)致敏小鼠的二次心臟移植模型中，使用FTY720和共刺激分子單克隆抗體的抑制方案，盡量減少Tm對(duì)二次移植物的浸潤(rùn)，從而達(dá)到延長(zhǎng)移植物生存期的目的，并

2、探討此中可能的機(jī)制。
　　 方法:首先構(gòu)建從BALB/C小鼠到C57BL/6小鼠的初次背部皮膚移植，4周后，受體C57BL/6小鼠排斥掉移植的皮膚，以此皮膚預(yù)致敏小鼠為受體，BALB/C小鼠為供體，進(jìn)行頸部異位心臟移植術(shù)，即是二次移植。根據(jù)用藥治療情況分成四組，對(duì)照組、FTY720組、共刺激分子單克隆抗體組和聯(lián)合用藥組。給藥方案為:FTY720的劑量為2mg·kg-1·day-1，心臟移植術(shù)前3天給藥，直至術(shù)后第14天;共刺激分

3、子單克隆抗體(Costimulator molecule monoclonal antibody,anti-mouse-LFA-1 and anti-mouse-CD40L mAb)用量分別為0.1 mg/次anti-mouse-LFA-1 mAb和0.25mg/次anti-mouse-CD40L mAb，術(shù)后第0，2，4，6天各給藥一次。觀察心臟移植物生存期，運(yùn)用免疫細(xì)胞學(xué)、分子學(xué)和蛋白學(xué)檢測(cè)TEM、Treg細(xì)胞，IL-2、IFN-γ

4、和IL-10、TGF-β等細(xì)胞因子，以及移植物中細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的情況和移植物病理切片等研究其可能機(jī)制。
　　 結(jié)果:
　　 1、FTY720組和共刺激分子單克隆抗體治療組的平均生存期(MST)分別為4.6天和4.7天，比較對(duì)照組MST為3.4天，具有差異性;在聯(lián)合用藥組，MST達(dá)到了18天，比較對(duì)照組和共刺激分子單克隆抗體組差異性顯著。
　　 2、在受體鼠外周血，治療組的CD4+和CD8+T細(xì)胞均明顯降低;

5、同時(shí)FTY720能使外周血中的CD4+和CD8+效應(yīng)性Tm(TEM)(CD44high CD62Llow)比例下降，聯(lián)合組比較共刺激分子單抗組，TEM比例下降也均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。FTY720使得脾臟中的CD4+TEM、CD8+TEM比例比較對(duì)照組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;聯(lián)合組CD4+TEM的變化較為顯著; FTY720組和聯(lián)合組的CD4+FOXP3+Treg比例比較對(duì)照組有明顯的升高，聯(lián)合組比較單克隆抗體組升高亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。外周淋巴結(jié)的

6、TEM變化與在脾臟中相似;比較對(duì)照組，Treg在聯(lián)合組的比例有明顯升高。
　　 3、MLR結(jié)果顯示，F(xiàn)TY720可以明顯抑制T淋巴細(xì)胞增殖，聯(lián)合組更明顯，CFSE熒光染色測(cè)定T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與此類似;MLR上清的細(xì)胞因子含量測(cè)定顯示FTY720組IL-2，INF-γ水平有不同程度下降，聯(lián)合組更明顯; TGF-β在聯(lián)合用藥組變化趨勢(shì)與IL-2相反。
　　 4、FTY720可以明顯減少CD8+TEM對(duì)心臟移植物的浸潤(rùn);心

7、臟移植物病理ISHLT評(píng)分也顯示了FTY720和聯(lián)合用藥組比較對(duì)照組存在明顯差異;聯(lián)合用藥組比較單用抗體組，ISHLT評(píng)分差異也具有顯著性;治療組心臟移植物的IL-2、IFN-γ mRNA的表達(dá)有不同程度下降，此差異在聯(lián)合組最為明顯;而IL-10、FOXP3的趨勢(shì)則與IL-2等相反。
　　 5、通過體重記錄和相關(guān)器官組織的病理切片評(píng)分，評(píng)估FTY720和抗體對(duì)受體小鼠的短期不良反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)兩者的安全性較好，病理評(píng)分不認(rèn)為有肝腎肺和

8、胃腸道的急性損害作用。
　　 結(jié)論:
　　 ①FTY720促進(jìn)歸巢，致使外周血CD4+和CD8+T細(xì)胞減少，并且大幅度減少CD4+和CD8+TEM亞群的比值，減少TEM對(duì)移植物的浸潤(rùn);
　　 ②FTY720單獨(dú)運(yùn)用或者聯(lián)合共刺激分子單克隆抗體可以誘導(dǎo)Treg的增殖、分化，增加IL-10和TGF-β的mRNA表達(dá)，促進(jìn)其分泌的相應(yīng)細(xì)胞因子水甲升高;
　　 ③FTY720可以明顯抑制TEM的增殖，抑制TEM分