抗hTNF-α單克隆抗體的制備及其抗體基因克隆研究.pdf

1、腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factotα，TNFα）是一種由活化的單核/巨噬細胞分泌的多功能細胞因子，研究表明：適量的TNFα可以協助宿主抵抗微生物入侵、殺傷某些腫瘤細胞或使體內腫瘤組織發(fā)生出血壞死，但過量的TNFα與其它炎性因子一起產生多種病理性損傷，可以引起組織損傷、重癥感染性休克、自身免疫性疾病等?？梢哉fTNF-α作為一個調節(jié)生理平衡的關鍵細胞因子，在人類對抗腫瘤及其他疾病中扮演了“雙刃劍”的角色。
　　

2、 通過抑制TNFα的活性作用可以對與TNFα有關的疾病產生治療作用，目前主要用于類風濕關節(jié)炎、抑制腫瘤的發(fā)生、生長和轉移以及對多藥耐藥的治療。以TNFα為靶點開發(fā)的藥物包括有很多，這些藥物從不同層次不同水平抑制TNFα的產生和發(fā)生作用從而達到抗TNFα治療的目的。臨床研究表明抗TNFα治療的藥物是安全的。
　　 本實驗在我室原有抗hTNF-α表達載體的基礎上，表達出可溶性hTNFα蛋白，之后用經典的細胞融合的方法獲得抗hTNF

3、α的雜交瘤細胞株；采用硫酸銨沉淀和蛋白G親和層析法純化腹水型單抗；采用ELISA酶鏈免疫分析方法測定其效價、抗體亞型和親和力；采用MTT法測定抗體阻斷hTNFα對L929細胞的細胞毒的作用和篩選拮抗型抗hTNFα單抗；流式細胞儀法測定抗體阻斷hTNFα誘導L929細胞凋亡的作用。最終獲得一株能穩(wěn)定分泌抗hTNFα抗體的雜交瘤細胞株XB10，分泌的抗體亞型為IgG2；該抗體能高親和力與hTNFα結合，特異性阻斷hTNFα對L929細胞的細