重組腺病毒介導的4-1BBIg基因治療延長小鼠同種心臟移植物存活的實驗研究.pdf

1、移植排斥反應的實質是同種反應性T細胞識別同種抗原后發(fā)生的細胞免疫應答，其機制為：移植術后，供、受者來源的DC可遷移至受者外周免疫器官，通過直接或間接識別途徑，向受者同種反應性T細胞提呈同種抗原，并使之激活，進而誘導針對同種抗原的免疫應答。因此，通過基因治療干預DC與同種反應性T細胞間的相互作用，有可能成為防治移植排斥反應的有效策略。迄今，多數干預策略的原理是阻斷同種免疫應答中DC和T細胞間的共刺激途徑，使T細胞因缺乏共刺激信號而失能(a

2、nergy)或凋亡。 參與T細胞活化的共刺激分子主要包括兩類，即免疫球蛋白超家族(IgSF)成員和腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)成員。研究顯示，單獨由IgSF共刺激分子(如CD28/B7)啟動的信號，并不能持續(xù)激活T細胞，也不能形成記憶性T細胞，還需TNFRSF共刺激分子參與。屬于TNFRSF的T細胞共刺激分子包括OX40、4-1BB、CD27、CD30和HVEM，均屬Ⅰ型跨膜蛋白。其中，CD27和HVEM組成性表達于n

3、aYveT細胞表面；OX40、4-1BB和CD30在T細胞識別抗原數小時后誘導性表達。 4-1BB于1989年在篩選活化T細胞cDNA文庫時被發(fā)現，其并不組成性表達于靜止T細胞表面，而僅表達于活化CD4+T、CD8+T和NK細胞等表面。最新研究表明，4-1BB也可表達于DC、單核細胞和中性粒細胞表面。4-1BB的配體表達于活化的APC(如DC、B細胞和單核/巨噬細胞)表面。根據4-1BB與4-1BBL所分別表達的細胞類型，提示4

4、-1BB可能參與固有免疫和適應性免疫應答的多個階段。近期研究顯示，與CD40相同，4-1BB也是參與DC活化的分子之一。通過啟動4-1BB信號途徑，可誘導DC產生IL-6和IL-12等，同時上調共刺激分子B7-1和B7-2表達。與CD40/CD40L信號途徑的不同之處是，CD40信號的啟動有賴于活化T細胞提供配體(CD40L)，而啟動DC表面4-1BB信號轉導的配體可能來源于鄰近的APC或DC自身。因此，4-1BB的生物學功能不僅限于參

5、與T細胞活化。研究發(fā)現：B7/CD28共刺激信號主要在T細胞活化的前期起作用，可促進T細胞增殖并維持其短期存活；4-1BB/4-1BBL信號通路主要在免疫應答后期被啟動，可維持T細胞活化，并是CD8+T細胞存活和記憶性細胞形成的必需條件。免疫應答過程中，尤其在CD28分子表達缺陷或功能障礙的情況下，4-1BB/4-1BBL通路可能在提供共刺激信號中發(fā)揮極為重要的作用。 結論 1.借助大腸桿菌BJ5183同源重組及AdEa

6、sy載體系統，成功制備攜帶小鼠4-1BB胞外段和人IgGFc融合基因的復制缺陷型重組腺病毒Ad4-1BBlg，國內外均未見相關報道。 2.在成功制備Ad4-1BBlg重組腺病毒的基礎上，初步探討其干預移植排斥反應的作用及機制。結果發(fā)現：Ad4-1BBlg可抑制同種反應性T細胞增殖和細胞因子分泌、抑制CD8+的IFN-γ+細胞產生、抑制單個核細胞浸潤移植物，并有效延長小鼠同種移植心臟存活時間。本課題研究成果可望為干預移植排斥反應提