阻斷信號傳導對延長小鼠同種異體移植心臟存活時間的影響.pdf

1、第一部分 用腺相關病毒載體轉染CTLA4Ig基因延長 小鼠同種異體移植心臟存活時間 目的評估用冠狀動脈灌注轉染rAAV-CTLA4Ig基因的轉染效率和對延長小鼠同種異體移植心臟存活時間的作用。方法實驗動物隨機分為治療組、對照組和非治療組。建立小鼠心臟移植模型，治療組小鼠(B10，H2b)在進行同種異體小鼠心臟移植時經(jīng)冠狀動脈灌注轉染治療基因rAAV-CTLA4Ig；對照組灌注報告基因rAAV-LacZ；非治療組灌

2、注磷酸緩沖液(PBS)。取rAAV-LacZ作為顯色報告基因。其β半乳糖的表達用X-gal染色顯示，測定基因轉染效率和植入C3H(H2k)體內(nèi)的同種異體B10(H2b)心臟的存活時間。結果灌注rAAV-LacZ后4-6周，30﹪-40﹪的心肌細胞X-gal染色呈強陽性；額外應用血管擴張藥物并不提高轉染率；轉染rAAV-CTLA4Ig基因明顯延長同種異體的B10移植心臟在受體C3H小鼠體內(nèi)的存活時間。結論通過冠狀動脈灌注，rAAV載體能成

3、功地進行小鼠心肌的基因轉染，轉染rAAV-CTLA4Ig可明顯抑制移植物的排斥反應。 第二部分 核因子-kappaB反義核苷酸對小鼠移植心臟存活時間的影響目的NF-κB在調(diào)節(jié)樹突狀細胞(APC)上的協(xié)同刺激分子具有重要作用，我們使用特定的反義硫代寡聚脫氧核苷酸(ODN)來特異性地抑制小鼠核因子-kappaB(NF-κB)的mRNA，導致APC協(xié)同刺激分子表達不足，延長同種異體移植心臟的存活時間。方法心臟移植術后緩釋滲透泵

4、被植入受體腹腔內(nèi)，通過泵全身給予對抗NF-kB-mRNA的ODN(簡稱抗NF-κB-ODN)，對照組動物通過緩釋泵給予錯配(mismatch)ODN或不用藥。結果正常受體C3H小鼠排斥同種異體移植心臟的中位存活時間(MST)是15d；14天應用12.5mg·kg·d抗NF-κB-ODN延長了同種異體移植心臟存活時間，中位存活時間是25d(P＜0.05)；而用錯配ODN對照組的中位存活時間是17d，與非用藥組比有顯著性，P＞0.05。為了

5、研究抗NF-κB-ODN免疫抑制作用的內(nèi)在機制，在移植手術后7天收集移植物浸潤細胞、脾臟T細胞、血清。的用抗NF-κB-ODN治療受體小鼠的新鮮分離炎癥浸潤細胞的供體特異性細胞毒活性明顯抑制，用抗NF-κB-ODN治療的受體脾T細胞的特異性細胞毒活性比非用藥組減弱。結論實驗顯示，抗NF-κB-ODN治療可明顯抑制同種異體移植后受體的免疫反應，使同種異體移植物的存活時間明顯延長。 第三部分 應用抗CD80，CD86反義寡聚

6、脫氧核苷酸轉導樹突狀細胞 延長小鼠同種異體移植心臟的存活時間 目的抗原遞呈細胞(antigen-presentingcell，APC)表達協(xié)同刺激分子，其對決定T細胞的免疫反應起重要作用。我們研究了樹突狀細胞(DC)轉導了高親和力的針對CD80或CD86-mRNA的反義寡聚脫氧核苷酸(簡稱抗CD80，CD86-mRNA-ODN)對DC表型和功能的影響。方法C57BL/10小鼠(B10，H2b)骨髓細胞在粒細胞-巨噬細胞集

7、落刺激因子(granulocyte-macrophagecolonystimulatingfactor，GM-CSF)和白介素4(IL-4)的刺激下產(chǎn)生DC，轉導抗CD80，CD86-mRNA-ODN，堿基錯配的反義ODN作為陰性對照，流式細胞儀檢測反義ODN對細胞表型的影響，體外混合淋巴反應和細胞毒性T淋巴細胞細胞毒效應檢測DC的功能，并檢測對同種異體移植的存活時間的影響。結果脂質(zhì)體可以提高ODN在DC的轉導；抗CD80，CD86-m