基于IgY的免疫磁珠夾心ELISA檢測華支睪吸蟲循環(huán)抗原的研究.pdf

1、華支睪吸蟲病是一種嚴(yán)重危害人類健康的食源性寄生蟲病，主要分布于東南亞地區(qū)和我國大部分省市。早期診斷極其重要，目前應(yīng)用較多的主要為免疫學(xué)方法。華支睪吸蟲病免疫學(xué)診斷包括循環(huán)抗原和特異性抗體的檢測，特異性抗體檢測在華支睪吸蟲病診斷中應(yīng)用廣泛，但抗體在治療后仍可存在，不能區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染；而循環(huán)抗原是活蟲存在的依據(jù)，因此，利用免疫學(xué)新技術(shù)開發(fā)敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場應(yīng)用的檢測華支睪吸蟲循環(huán)抗原的方法是防治工作的重點(diǎn)。
　　本研

2、究首先制備了華支睪吸蟲重組半胱氨酸蛋白酶(rCsCp)，以該重組蛋白免疫母雞，使用試劑盒提取和純化抗rCsCp的雞卵黃免疫球蛋白（IgY），并對純化后的IgY進(jìn)行鑒定，制備得到分子量為270kDa的特異性抗rCsCp的IgY多克隆抗體（anti-rCsCp IgY）。將anti-rCsCp IgY耦聯(lián)在納米磁珠上，以辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的兔抗rCsCP多克隆抗體IgG（HRP-IgG）作為檢測抗體，建立了基于IgY的免疫磁珠夾心

3、ELISA（IgY-IMB-ELISA）法，此法最低可檢測出7.8ng/ml的rCsCP。
　　用此方法檢測華支睪吸蟲感染病人血清中循環(huán)抗原，結(jié)果顯示，用IgY-IMB-ELISA法檢測重度感染組（每克糞便蟲卵數(shù)5000-9999）、中度感染組（每克糞便蟲卵數(shù)1000-4999）和輕度感染組患者（每克糞便蟲卵數(shù)1-999），其檢出率分別是93.33％（14/15）、86.67％（13/15）和75％（9/12），檢出率與糞便中蟲卵

4、數(shù)成正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.83）。與正常人（0/20）、豬囊尾蚴病人（0/10）和旋毛蟲病人（0/10）血清無反應(yīng)；與慢性日本血吸蟲病人及肺吸蟲病人的交叉反應(yīng)率分別為6.67％（2/30）和10％（3/30）。IgY-IMB-ELISA法檢測華支睪吸蟲病人的特異性為95％。因此，IgY-IMB-ELISA法可有效地檢測出華支睪吸蟲患者血清中循環(huán)抗原，與其他常見寄生蟲病的交叉反應(yīng)性較低，提示基于IgY的免疫磁珠ELISA法是一種敏感性好、特