華支睪吸蟲成蟲抗原致敏樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的研究.pdf

1、目的: 通過研究華支睪吸蟲成蟲蟲體抗原（CA）體外致敏的樹突狀細(xì)胞（DCs）分泌IL-12p70、刺激初始性T 細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)T 細(xì)胞分泌IFN-γ和IL-4 的能力，探討在華支睪吸蟲感染小鼠后CA 對DCs 免疫活性的影響及進(jìn)而誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的類型。
　　 方法:
　　 （1）成蟲蟲體抗原的制備：從感染華支睪吸蟲的麥穗魚中獲取囊蚴，感染豚鼠，飼養(yǎng)50d 后，無菌取成蟲，經(jīng)勻漿，反復(fù)凍融，冷浸，超聲破碎，再冷浸后低溫超速離

2、心，收集上清即為CA。
　　 （2）DCs 的制備及鑒定：用rmGM-CSF 誘導(dǎo)分化BABL/c 小鼠骨髓細(xì)胞獲得DCs，通過觀察細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞表面分子及刺激T 細(xì)胞增殖進(jìn)行DCs 的鑒定。
　　 （3）收集DCs，分組加相應(yīng)致敏原， DC-LPS 組：LPS 1μg/ml；DC-RPMI 組：等量的RPMI-164 培養(yǎng)基；DC-CA 組：80μg/ml CA，置37℃，5％CO2 孵箱培養(yǎng)24h，收集上清測IL-1

3、2p70。
　　 （4）同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(AMLR)：各組DCs 用絲裂霉素c 滅活后和同種異體淋巴細(xì)胞按一定比例混合共培養(yǎng)3d，收集上清測IFN-γ和IL-4，用CCK-8 試劑盒檢測T 細(xì)胞增殖情況。
　　 （5）ELISA 檢測細(xì)胞因子IL-12p70、IFN-γ和IL-4。
　　 結(jié)果:
　　 (1) 不同階段DCs 分化程度和形態(tài)各異，培養(yǎng)7d 后，細(xì)胞表面可見明顯的樹突狀突起。mDCs

4、 表面有大量毛刺樣突起，呈懸浮狀態(tài)。透射電鏡下可見典型的DCs 的形態(tài)特征。
　　 (2) 培養(yǎng)的細(xì)胞表面表達(dá)較高M(jìn)HC II 和CD86 分子，經(jīng)LPS致敏后表達(dá)顯著上調(diào)。
　　 (3) DCs 分泌IL-12p70 的量：DC-CA 組分泌IL-12p70 量明顯高于DC-RPMI 組，而低于DC-LPS 組。
　　 (4) DCs 誘導(dǎo)T 細(xì)胞增殖情況：同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，DC-CA 組對T 淋巴細(xì)胞

5、的刺激指數(shù)高于DC-RPMI 組，而低于DC-LPS 組。DC-CA 組和DC-LPS 組分別與DC-RPMI 組進(jìn)行兩兩比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 （5）DCs 和T 淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)上清中IFN-γ的量：DC:T 為1:5和1:10 時(shí)，混合淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)上清中，DC-CA組IFN-γ的水平明顯高于DC-RPMI組，而低于DC-LPS 組；DC:T 為1:20 時(shí)各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 （6）DCs 和T淋巴

6、細(xì)胞共培養(yǎng)上清中IL-4 的量：混合淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，各組培養(yǎng)上清中IL-4 的水平均非常低，差別無顯著性。
　　 結(jié)論:
　　 （1）CA 的刺激能促進(jìn)BALB/c 小鼠骨髓來源的DCs 分泌IL-12。
　　 （2）CA致敏的DCs 具有啟動免疫應(yīng)答的能力。
　　 （3）CA 致敏的DCs 能誘導(dǎo)Th0 細(xì)胞向Th1 方向極化，CA 致敏DCs 誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)與華支睪吸蟲感染早期的保護(hù)性免疫有密切相關(guān)。