ATC-IC致敏樹(shù)突狀細(xì)胞抗腎癌免疫效果評(píng)價(jià).pdf

1、目的
　　 1、根據(jù)抗原-抗體免疫反應(yīng)原理,制備ATC-IC,為進(jìn)一步將ATC-IC作為腫瘤抗原物質(zhì)致敏DC做好準(zhǔn)備。
　　 2、通過(guò)檢測(cè)DC負(fù)載ATC-IC后的表型及分泌因子變化情況,探討ATC-IC對(duì)DC生物學(xué)功能的影響。
　　 3、通過(guò)檢NDC負(fù)載ATC-IC后激活的CTL對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷率的影響,評(píng)價(jià)DC負(fù)載ATC-IC后誘導(dǎo)的抗腎癌免疫效果情況。
　　 方法
　　 1、用5-氟尿嘧啶誘導(dǎo)

2、腎癌細(xì)胞凋亡,獲取凋亡腎癌細(xì)胞后與G250單抗結(jié)合,形成復(fù)合物ATC-IC后,用其致敏iDC,未致敏iDC為對(duì)照組。
　　 2、用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC負(fù)載ATC-IC后其表面分子CD83、CD86、CD80及HLA的變化情況。
　　 3、ELISA試劑盒檢測(cè)DC分泌IL-12和IFN-γ等細(xì)胞因子的量的變化。
　　 4、MTT法檢測(cè)DC負(fù)載ATC-IC后對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。
　　 5、CCK-8檢測(cè)

3、DC負(fù)載ATC-IC后激活的CTL對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。
　　 結(jié)果
　　 1、獲取凋亡的腫瘤細(xì)胞,G250單抗與凋亡細(xì)胞表面的G250抗原特異性結(jié)合,形成復(fù)合物ATC-IC。
　　 2、DC的表型變化
　　 相對(duì)于負(fù)載ATC、G250單抗和未負(fù)載的DC,負(fù)載ATC-IC的DC疫苗顯著上調(diào)CD86、CD80、CD83和HLA的表達(dá)(42.04%vs28.34%、33.77%、26.52%,P＜0.05;3

4、8.17%vs23.79%、31.94%、24.32%,P＜0.05;79.39%vs69.06%、74.49%、66.71%,P＜0.05;35.52%vs26.90%、29.45%、27.42%,P＜0.05),以CD86的上調(diào)最為顯著。
　　 3、DC分泌細(xì)胞因子情況
　　 各組DC培養(yǎng)7-9d后,雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清結(jié)果提示,IL-12、IFN-γ分泌水平均上調(diào)(25.04vs5.27、13.32、

5、7.53,P＜0.05;63.23vs51.74、52.43、49.04,P＜0.05)。
　　 4、T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)
　　 以各組mDC為刺激細(xì)胞,分離培養(yǎng)的T淋巴細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,兩者以1:1、1:10、1:50及1:100的比例共培養(yǎng)48h后,測(cè)量各組異體T細(xì)胞增殖結(jié)果顯示,各組mDC均能刺激T淋巴細(xì)胞的增殖,以ATC-IC致敏組mDC刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力最顯著(P＜0.05),并且效靶比在1:10時(shí)刺激能力最強(qiáng)

6、(4.02±0.13vs1.73±0.09、1.22±0.10、1.41±0.12,P＜0.01)。
　　 5、CTL對(duì)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞的殺傷活性
　　 (1)不同效應(yīng)細(xì)胞間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),以DC+ATC-IC組殺傷活性較高,單獨(dú)T淋巴細(xì)胞對(duì)照組殺傷率最低;
　　 (2)不同效靶比間差異有顯著性意義,殺傷活性隨效靶比的增大而增強(qiáng),殺傷率由高到低依次為20:1、10:1、5:1、2.5:1,差異具

7、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　 (3)DC+ATC-IC組誘導(dǎo)的CTLs對(duì)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞786-0的殺傷活性高于肺腺癌細(xì)胞A549,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1、5-氟尿嘧啶誘導(dǎo)出的凋亡腎癌細(xì)胞,與G250單抗可特異性結(jié)合形成復(fù)合物ATC-IC。
　　 2、ATC-IC致敏DC后,可上調(diào)DC表面分子表達(dá)水平,促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌,并有效的刺激異體T淋巴細(xì)胞的增殖。