基于瓊脂磁珠的核酸信標(biāo)配基雙抗夾心法免疫-PCR檢測技術(shù)的研究.pdf

1、隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對分子檢測技術(shù)的特異性、靈敏度將會(huì)有更高要求。尤其在基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用中，分子的定性和定量檢測具有非常重要的意義。因此，探索新技術(shù)或改進(jìn)現(xiàn)有技術(shù)以提高分子水平的精確定量，突破檢測技術(shù)這一瓶頸，是目前科研工作中的研究熱點(diǎn)。
　　本實(shí)驗(yàn)以瓊脂磁珠為載體，結(jié)合核酸信標(biāo)配基建立一種新型微量蛋白檢測方法。為了檢測技術(shù)的成功建立，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了不斷地摸索，確立了該檢測技術(shù)的基本流程，即利用瓊脂磁珠固定多抗，多抗結(jié)合靶標(biāo)蛋白，

2、再結(jié)合一抗，最后與一抗特異性核酸信標(biāo)配基結(jié)合，經(jīng)過洗脫分離，完成靶標(biāo)蛋白到核酸信標(biāo)配基的信號轉(zhuǎn)換，采用實(shí)時(shí)定量-PCR技術(shù)對核酸信標(biāo)配基進(jìn)行快速定量檢測，間接的完成對靶標(biāo)蛋白的檢測。為了達(dá)到最佳檢測效果，本實(shí)驗(yàn)對相應(yīng)抗原、抗體最佳稀釋倍數(shù)、核酸信標(biāo)配基特異性、核酸信標(biāo)配基最佳稀釋倍數(shù)及結(jié)合時(shí)間、實(shí)驗(yàn)洗脫試劑、洗脫方式、封閉效果等各項(xiàng)條件進(jìn)行了優(yōu)化改進(jìn)。結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)中相應(yīng)抗原抗體的活性良好且最佳稀釋倍數(shù)均為100倍；核酸信標(biāo)配基特異性強(qiáng)

3、（即只和一抗特異性結(jié)合），其最佳稀釋倍數(shù)為50倍，最佳結(jié)合時(shí)間為30 min；實(shí)驗(yàn)最佳洗脫試劑為SSC，最佳洗脫方式為10×SSC、5×SSC、2×SSC依次洗脫；封閉與否效果相似；又對該方法的檢測準(zhǔn)確性、靈敏度及重復(fù)性進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。結(jié)果顯示：優(yōu)化后的核酸信標(biāo)配基雙抗夾心免疫-PCR檢測技術(shù)對特異性靶標(biāo)蛋白識別性強(qiáng)，靈敏度高，定量準(zhǔn)確，具有可行性。
　　本技術(shù)將核酸信標(biāo)配基的信號擴(kuò)增特性與瓊脂磁珠的載體特性結(jié)合起來，并采用有機(jī)溶