抗弓形蟲(chóng)可溶性抗原的雞卵黃免疫球蛋白(IgY)檢測(cè)弓形蟲(chóng)循環(huán)抗原的可行性研究.pdf

1、弓形蟲(chóng)病是由剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)所引起的人畜共患病,廣泛流行于世界各地。弓形蟲(chóng)病對(duì)孕產(chǎn)婦的危害已得到臨床醫(yī)務(wù)工作者公認(rèn)。孕婦感染弓形蟲(chóng)后,可通過(guò)胎盤將弓形蟲(chóng)垂直傳播給胎兒,造成流產(chǎn)、死胎、畸胎、新生兒智力發(fā)育不全、嬰兒先天性弓形蟲(chóng)病等。近年來(lái)隨著對(duì)艾滋病、惡性腫瘤等免疫功能損傷患者因感染弓形蟲(chóng)而導(dǎo)致死亡報(bào)道的增多而逐漸引起重視。因此,早期診斷弓形蟲(chóng)病對(duì)于預(yù)防異常胎兒及將弓形蟲(chóng)病對(duì)孕婦的危害降到最低限度具有重要

2、的意義。目前臨床常用病原學(xué)檢查、血清學(xué)試驗(yàn)及分子生物學(xué)等方法診斷弓形蟲(chóng)病。動(dòng)物接種分離和細(xì)胞培養(yǎng)操作復(fù)雜,陽(yáng)性率又不高,現(xiàn)代分子生物學(xué)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求較高且需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格訓(xùn)練的專門技術(shù)人員,血清學(xué)方法檢測(cè)相應(yīng)的抗體雖然操作簡(jiǎn)單,特異性好,靈敏度高,但不能區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染,因此研制檢測(cè)能代表現(xiàn)癥感染的循環(huán)抗原的技術(shù)是一項(xiàng)迫切的任務(wù)。
　　研究證實(shí) IgY具有特異性抗體產(chǎn)量高、不與哺乳動(dòng)物免疫球蛋白發(fā)生血清交叉反應(yīng)、制備及提純

3、簡(jiǎn)單、性質(zhì)穩(wěn)定等特點(diǎn)。為了探討 IgY在弓形蟲(chóng)病診斷中的應(yīng)用價(jià)值,本研究采用物理過(guò)濾方法制備弓形蟲(chóng)可溶性抗原,再用這種抗原免疫雞,制備并純化特異性抗弓形蟲(chóng)可溶性抗原的雞卵黃免疫球蛋白(Eggyolk immunoglobulin,IgY),BCA法測(cè)定蛋白含量,進(jìn)行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析, ELISA法行抗弓形蟲(chóng)可溶性抗原IgY與弓形蟲(chóng)可溶性抗原結(jié)合試驗(yàn),同時(shí)行感染弓形蟲(chóng)大鼠血清與弓形蟲(chóng)可溶性抗原結(jié)合

4、試驗(yàn),通過(guò)兩次試驗(yàn)比較,探討抗弓形蟲(chóng)可溶性抗原IgY應(yīng)用于弓形蟲(chóng)病診斷的可能性。
　　采用物理過(guò)濾法制備弓形蟲(chóng)可溶性抗原,濃度為550.5μg/ml。每枚雞蛋經(jīng)EGGstract IgY Purication System提取及純化后,抗弓形蟲(chóng)IgY濃度為5252.3μg/ml。純化后的IgY經(jīng)還原型SDS-PAGE鑒定,有3條主帶,分子量分別為80kDa、60kDa、38kDa,非還原型SDS-PAGE鑒定,有2條主帶,分子量分

5、別為180kDa、60kDa。ELISA結(jié)果顯示,當(dāng)抗弓形蟲(chóng)可溶性抗原IgY稀釋度為1:200時(shí),可檢出0.13～0.25μg/100μl的弓形蟲(chóng)可溶性抗原。而相同稀釋度的感染弓形蟲(chóng)大鼠血清只可檢出1μg/100μl的弓形蟲(chóng)可溶性抗原?？构蜗x(chóng)可溶性抗原 IgY稀釋度為1:10時(shí)可檢測(cè)出0.02μg/100μl的弓形蟲(chóng)可溶性抗原。以上結(jié)果提示,基于抗弓形蟲(chóng)IgY檢測(cè)弓形蟲(chóng)的循環(huán)抗原是可行的。
　　抗弓形蟲(chóng)雞卵黃抗體與弓形蟲(chóng)抗原結(jié)合