β1整合素對(duì)淋巴瘤細(xì)胞增殖、遷移和藥物敏感性的影響及姜黃素的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、第一部分 姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期作用的研究 [目的]研究姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞體外抗癌作用及其機(jī)制，對(duì)比研究其對(duì)Raji細(xì)胞和人單個(gè)核細(xì)胞的細(xì)胞毒性。 [方法]用MTT法檢測(cè)姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞及人單個(gè)核細(xì)胞增殖的影響，Annexin-V/PI雙標(biāo)流式術(shù)法檢測(cè)姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞及人單個(gè)核細(xì)胞凋亡的影響，PI單標(biāo)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞DNA含量分布的影響。 [結(jié)果](1)姜黃素

2、對(duì)Raji細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用。(2)姜黃素可以時(shí)間和劑量依賴性方式誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡。(3)姜黃素處理組Raji細(xì)胞周期發(fā)生變化，細(xì)胞周期被阻滯于G0/G1和G2/M期，S期比例減少。(4)姜黃素對(duì)人單個(gè)核細(xì)胞無明顯抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡作用。 [結(jié)論]姜黃素能夠調(diào)控Raji細(xì)胞的細(xì)胞周期并誘導(dǎo)其凋亡，從而抑制Raji細(xì)胞增殖。姜黃素對(duì)人單個(gè)核細(xì)胞無明顯細(xì)胞毒作用，而選擇性作用于腫瘤細(xì)胞。 第二部分 β1整

3、合素在淋巴瘤中的表達(dá)及姜黃素的影響 [目的]研究β1整合素在淋巴瘤中的表達(dá)及姜黃素的影響 [方法]免疫組化法檢測(cè)B細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤和反應(yīng)性增生淋巴結(jié)中β1整合素表達(dá)的差異；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Raji細(xì)胞、Daudi細(xì)胞和正常人外周血淋巴細(xì)胞β1整合素表達(dá)的差異；流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR方法檢測(cè)姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞β1整合素mRNA和蛋白水平的影響； [結(jié)果](1)β1整合素在Raji細(xì)胞中高表達(dá)，Daudi細(xì)

4、胞及正常人外周血B淋巴細(xì)胞中β1整合素表達(dá)水平很低。(2)T細(xì)胞淋巴瘤淋巴結(jié)和反應(yīng)性增生淋巴結(jié)β1整合素麥達(dá)顯著低于B細(xì)胞淋巴瘤淋巴結(jié)。(3)低濃度姜黃素即能顯著抑制β1整合素的表達(dá)。 [結(jié)論]β1整合素在Raji細(xì)胞中高表達(dá)，在正常人淋巴結(jié)和外周血淋巴細(xì)胞中低表達(dá)，提示β1整合素是一個(gè)有前途的淋巴瘤抗粘附治療靶點(diǎn)。而且β1整合素在不同類型淋巴瘤中的表達(dá)水平不同，提示β1整合素對(duì)于淋巴瘤的鑒別診斷具有重要意義，以β1整合素為靶點(diǎn)

5、研究藥物的抗淋巴瘤作用可能具有重要意義。姜黃素能顯著抑制β1整合素的表達(dá)，有希望成為抑制淋巴瘤侵襲、播散的新藥。 第三部分 姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞化療敏感性的影響及其機(jī)制的研究 [目的]研究FN/整合素途徑在調(diào)節(jié)淋巴瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性中的作用及姜黃素體外增敏淋巴瘤細(xì)胞的作用及其機(jī)制。 [方法]采用MTT法檢測(cè)陰性對(duì)照組、Cur組、ADR組、Cur+ADR組、FN+ADR組、FN+anti-integri

6、n+ADR、Cur+FN+ADR組各組細(xì)胞的增殖抑制率。金氏公式進(jìn)行聯(lián)合用藥分析。 [結(jié)果]Cur與ADR合用對(duì)Raji細(xì)胞呈單純相加至增強(qiáng)效應(yīng)。Raji細(xì)胞與FN作用后，再給予半致死劑量的阿霉素(400mg/L)，細(xì)胞增殖抑制率為32.5％，與未加FN的Raji細(xì)胞(抑制率53.1％)相比，兩組之間有非常顯著差異(P＜0.01)。將抗β1整合素抗體阻斷Raji細(xì)胞上與FN結(jié)合的β1整合素，阿霉素對(duì)細(xì)胞的抑制率恢復(fù)至54.6％。

7、Raji細(xì)胞株與FN和6.25μmol/L姜黃素同時(shí)培養(yǎng)，阿霉素對(duì)其的抑制率為59.2％，顯著高于FN+ADR組(P＜0.01)。 [結(jié)論]FN/β1整合素參與調(diào)節(jié)Raji細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性，姜黃素可能通過下調(diào)整合素的表達(dá)抑制FN/β1整合素途徑的激活來增加Raji細(xì)胞株對(duì)化療藥物的敏感性。 第四部分 姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞粘附侵襲的調(diào)節(jié)作用 [目的]研究姜黃素調(diào)節(jié)SDF1/CXCR4和FN/β1整合素途

8、徑對(duì)B淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞粘附和遷移的影響，探討姜黃素抑制淋巴瘤侵襲的機(jī)制。 [方法]本實(shí)驗(yàn)共分7組，陰性對(duì)照、FN、SDF、FN+抗β1整合素抗體、SDF+抗β1整合素抗體、SDF+抗CXCR4抗體、姜黃素+FN、姜黃素+SDF各組，采用粘附、遷移試驗(yàn)檢測(cè)各組Raji細(xì)胞侵襲能力的差異。 [結(jié)果]在體外SDF1和FN均能增加Raji細(xì)胞粘附、浸潤(rùn)能力，并且此作用能分別被抗β1整合素抗體和抗CXCR4抗體阻斷。姜黃素