整合素表達(dá)和MLCK活性對肝癌細(xì)胞粘附及遷移特性的影響.pdf

1、肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移特性在體外二維培養(yǎng)中表現(xiàn)為細(xì)胞頻發(fā)形變,粘附不穩(wěn)定,遷移速率增快和遷移方向頻繁改變。整合素和MLCK是腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附穩(wěn)定性和為細(xì)胞遷移提供驅(qū)動力的兩個重要分子。從整合素和MLCK對細(xì)胞粘附及運(yùn)動的影響,研究腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制有重要的理論意義。目的通過對肝癌細(xì)胞整合素受—配體表達(dá)不平衡對其粘附特性的影響和MLCK抑制劑ML-7對肝癌細(xì)胞增殖和遷移運(yùn)動的影響,探索肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的過程機(jī)制。方法運(yùn)用細(xì)

2、胞形態(tài)學(xué)觀察,圖像分析軟件,微管吸吮和流式細(xì)胞儀等手段,分別對肝癌細(xì)胞,正常肝細(xì)胞整合素表達(dá)水平及其配體纖維連接蛋白(Fibronectin,Fn)裱襯后的肝癌細(xì)胞的運(yùn)動變形能力及粘附力進(jìn)行檢測和定量分析。通過細(xì)胞同步化,免疫熒光和免疫組化等實(shí)驗(yàn)技術(shù)對MLCK抑制劑ML-7作用前后肝癌細(xì)胞增殖,細(xì)胞骨架變化及細(xì)胞運(yùn)動能力進(jìn)行檢測和定量分析。結(jié)果肝癌細(xì)胞的整合素表達(dá)量高于正常肝細(xì)胞;Fn可下調(diào)整合素的過表達(dá);補(bǔ)充適當(dāng)濃度胞外配體Fn(2.

3、3μg/ml)可使胞外受配體比例恢復(fù)到正常肝細(xì)胞的整合素表達(dá)水平,肝癌細(xì)胞的粘附力增強(qiáng),細(xì)胞運(yùn)動能力減弱；隨著MLCK抑制劑,ML-7濃度的增加,肝癌細(xì)胞增殖受到抑制,細(xì)胞由不規(guī)則的多邊形趨向圓形;MLCK表達(dá)減弱,并由細(xì)胞膜周邊向胞內(nèi)轉(zhuǎn)移;骨架解聚,應(yīng)力纖維松弛,細(xì)胞遷移速率降低。結(jié)論胞外配體Fn對肝癌細(xì)胞整合素過表達(dá)有下調(diào)作用,肝癌細(xì)胞的受—配體比例是影響其粘附和運(yùn)動的因素之一,細(xì)胞形變和骨架去裝配與MLCK活性抑制程度相關(guān);低濃度