Rab27B對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和遷移能力的影響.pdf

1、原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer)是人類最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,發(fā)生和致死率極高。據(jù)世界衛(wèi)生組織2008年統(tǒng)計(jì)分析報(bào)告表明:目前全球每年的新增發(fā)病人數(shù)已超過(guò)74.8萬(wàn),病死人數(shù)高達(dá)69.6萬(wàn),位居全球惡性腫瘤發(fā)病率第5位,病死原因第3位。其中百分之八十五的病例集中在發(fā)展中國(guó)家,更有50％的新發(fā)和死亡肝癌病例發(fā)生在中國(guó),同時(shí)肝癌在西方國(guó)家的發(fā)病率也在不斷增長(zhǎng)。
　　肝癌中約70%-85%屬于肝細(xì)胞癌(Hepatoc

2、ellular carcinoma,HCC),其特點(diǎn)是誘因復(fù)雜,起病隱匿,發(fā)展迅速,而且極易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,這也是影響其術(shù)后治療效果和預(yù)后的最大障礙。
　　腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞間存有高度密切的信息交流。這也是其異型相互作用浸潤(rùn)性生長(zhǎng),逐步發(fā)展,最終造成轉(zhuǎn)移的先決條件。腫瘤細(xì)胞交流方式有細(xì)胞間直接接觸和間接釋放單分子,或(包裹分泌物)膜狀小泡三種方式。Rab蛋白是小分子GTP結(jié)合蛋白家族（small GTP-binding protein

3、s)中最大的亞家族,在所有真核生物中均表達(dá),Rab家族中迄今為止己發(fā)現(xiàn)了超過(guò)60個(gè)成員,負(fù)責(zé)著真核生物內(nèi)膜系統(tǒng)的運(yùn)輸功能。其中Rab27亞族包括兩個(gè)成員:Rab27A和Rab27B。Rab27B主要通過(guò)與其效應(yīng)分子的相互作用來(lái)發(fā)揮功能,主要是參與大多數(shù)分泌性細(xì)胞的胞吐作用及多泡體的運(yùn)輸過(guò)程。已有研究表明:Rab27B在乳腺癌,胃癌等多種上皮來(lái)源腫瘤細(xì)胞中有表達(dá),并與乳腺癌轉(zhuǎn)移和侵襲性相關(guān)。實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)Rab27B分子在高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)

4、胞株表達(dá)上調(diào),猜想Rab27B的表達(dá)可能和肝癌的侵襲和遷移存在一定相關(guān)性,然而Rab27B與肝細(xì)胞癌增殖、遷移運(yùn)動(dòng)相關(guān)性及其參與的分子機(jī)制尚未見(jiàn)系統(tǒng)的研究報(bào)道。
　　為了進(jìn)一步確定Rab27B與HCC發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性,我們首先采用Western blot方法檢測(cè)在6株不同轉(zhuǎn)移能力的人肝癌細(xì)胞系中檢測(cè)Rab27B蛋白表達(dá)水平,驗(yàn)證其與肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力相關(guān)性,并檢測(cè)了Rab27B分子的細(xì)胞定位,以探討定位和功能的關(guān)系。在此基礎(chǔ)

5、上,選取較高轉(zhuǎn)移能力的HCC細(xì)胞株MHCC97H作為細(xì)胞模型,采用RNAi技術(shù)構(gòu)建針對(duì)Rab27B基因的特異性shRNA慢病毒載體,篩選到穩(wěn)定敲低Rab27B的MHCC97H細(xì)胞株,命名為shRab27B-1＃和shRab27B-2＃,其Rab27B的表達(dá)水平與陰性對(duì)照MHCC97H-NC細(xì)胞相比顯著下降。
　　選取較低轉(zhuǎn)移能力的HCC細(xì)胞株MHCC97L作為細(xì)胞模型,通過(guò)基因過(guò)表達(dá)技術(shù),構(gòu)建重組慢病毒表達(dá)載體,并篩選得到穩(wěn)定過(guò)表

6、達(dá) Rab27A,Rab27B和Rab27B-GER基因的MHCC97L細(xì)胞株和陰性對(duì)照細(xì)胞株,其Rab27B蛋白表達(dá)水平與陰性對(duì)照組MHCC97L-GFP細(xì)胞相比顯著增高。
　　HCC的轉(zhuǎn)移過(guò)程中涉及到細(xì)胞的增殖、黏附、遷移和侵襲等方面的特性,因此本研究也從這幾個(gè)方面進(jìn)行。首先,Rab27B在MHCC97H細(xì)胞中表達(dá)定位于胞質(zhì)中,通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)比較Rab27B穩(wěn)定敲低和過(guò)表達(dá)細(xì)胞株和陰性對(duì)照細(xì)胞株的增殖、黏附、遷移和侵襲能力,結(jié)果