miR-141對肝癌細胞Huh7遷移和對HCV復制能力影響的機制研究.pdf

1、目的:microRNA(miRNA)是一類非編碼的單鏈小RNA分子,長度為18-22個核苷酸,具有轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因表達的功能。研究表明,miRNA幾乎在所有細胞的生物學過程包括代謝、生存、分化和凋亡中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。特定miRNA的表達下調(diào)導致多種疾病,尤其是腫瘤的發(fā)生發(fā)展。我們及其他研究表明,在肝癌組織中miR-141表達明顯下調(diào),但其具體作用機制尚無報道,我們研究目的之一擬對肝癌細胞Huh7遷移能力是否受miR-141的調(diào)控進行初

2、步探討,以期提供肝癌轉(zhuǎn)移的新標向,具有重要的研究意義。
　　HCV的慢性感染容易導致肝硬化和肝癌,在中國,HCV感染率呈逐年上升趨勢。據(jù)研究報道,不同的miRNA能促進或抑制病毒的復制,但miR-141對HCV復制的影響目前尚不清楚,我們的研究目的之二擬探討miR-141對HCV復制的影響及其機制,以期探索臨床上治療HCV感染的新靶點,具有重要的臨床價值。
　　方法:
　　1.利用慢病毒載體感染Huh7,建立穩(wěn)定高表達

3、miR-141的Huh7-miR-141-LV及其陰性對照組Huh7-NC-LV;
　　2.TranswellAssay檢測miR-141在Huh7內(nèi)高表達和被抑制后,對細胞遷移能力的影響;
　　3.qRT-PCR檢測miR-141在Huh7內(nèi)高表達后對JFH1復制的影響;
　　4.qRT-PCR及WesternBlot分別檢測細胞TGF-β、TLR/IRF信號通路中相關(guān)分子及MMP2/MMP9在mRNA水平及蛋白質(zhì)水

4、平的表達量;
　　5.雙熒光素酶報道基因檢測IFN-βLuc的活性。
　　結(jié)果:
　　1.利用慢病毒載體感染成功建立了穩(wěn)定高表達miR-141的Huh7-miR-141-LV。
　　2.miR-141在Huh7中高表達后能顯著抑制Huh7遷移,而被抑制后,Huh7的遷移能力上升,因此miR-141是影響Huh7遷移能力的一個重要的因素。
　　3.在Huh7中高表達miR-141后,可通過降低其靶基因TGF-

5、βR1的mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達量,阻斷TGF-β信號通路,進而抑制Huh7的遷移能力;在Huh7中高表達miR-141后,還可降低MMP2和MMP9的表達量。
　　4.miR-141在Huh7中高表達后能顯著抑制HCV毒株JFH1的復制能力,并成時間依賴性。
　　5.在JFH1感染Huh7-miR-141-LV后,可促進TLR/IRF信號途徑中的TLR7、TLR9、IRF7的mRNA水平和IRF3的蛋白質(zhì)水平。

6、>　　6.在JFH1感染前后,Huh7-miR-141-LV中IFN-βLuciferase的活性都比Huh7-NC-LV中強,因此miR-141可能通過促進TLR7、TLR9和IRF3、IRF7的表達,激活I(lǐng)FN-β啟動子,從而抑制JFH1在Huh7中的復制能力。
　　結(jié)論:
　　1.miR-141在Huh7中高表達后,通過TGF-βR1阻斷TGF-β信號通路影響Huh7的遷移能力。MMP2和MMP9能促進腫瘤細胞的遷移,

7、而miR-141在Huh7中高表達后,可明顯降低MMP2和MMP9的mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達量,但miR-141對MMP2和MMP9的具體作用機制尚不清楚,還需進一步深入研究。
　　2.在病毒感染細胞后,激活TLR/IRF信號通路,進而誘導I型干擾素IFNα/β的表達,引起細胞的抗病毒免疫應答。miR-141可能通過促進TLR7、TLR9和IRF3、IRF7的表達,激活I(lǐng)FN-β的啟動子,進而抑制JFH1在Huh7中的復制能