MiR-200a和miR-141對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC7901生物學(xué)行為的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、目的:探討轉(zhuǎn)染miR-200a mimics和miR-141 mimics對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC7901生物學(xué)行為的影響，包括細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，并探討其可能作用的機(jī)制。
　　 方法:應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的寡聚核苷酸miR-200a mimics和miR-141mimics靶向單獨(dú)或聯(lián)合轉(zhuǎn)染人胃腺癌細(xì)胞株SGC7901，同時(shí)設(shè)未轉(zhuǎn)染組(Control)、無義序列轉(zhuǎn)染組(Scrambled)。應(yīng)用Real time PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各

2、組miRNA的表達(dá);MTT法檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的增殖活性;Transwell小室法和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的侵襲和遷移能力的變化;Western blot實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、E盒結(jié)合鋅指蛋白-2(ZEB2)、N-鈣黏蛋白(N-cadherin)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.轉(zhuǎn)染48h后，Real time PCR結(jié)果顯示，

3、與Control和Scrambled組相比，miR-200aMimi、miR-141Mimi和Combined組細(xì)胞miRNA的表達(dá)水平均升高，且Combined組中miRNA的表達(dá)水平高于miR-200a Mimi、miR-141 Mimi組。結(jié)果證實(shí)轉(zhuǎn)染后成功調(diào)控了miR-200a、miR-141在人胃癌細(xì)胞株SGC7901中的表達(dá)，可滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。
　　 2.MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖活性的結(jié)果顯示:與Control

4、和Scrambled組相比，miR-200a Mimi、miR-141Mimi和Combined組在轉(zhuǎn)染后2d細(xì)胞增殖能力明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而且轉(zhuǎn)染后2d Combined組細(xì)胞增殖能力明顯低于miR-200a Mimi、miR-141 Mimi組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力的結(jié)果顯示:miR-200a Mimi、miR-141 Mimi和C

5、ombined組的穿膜細(xì)胞數(shù)分別為76.33±3.79、65.33±4.72、29.67±2.08，明顯低于Control組（137.67±5.13）和Scrambled組（136.67±6.03），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且Combined組的細(xì)胞穿膜數(shù)明顯少于miR-200aMimi、miR-141 Mimi組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 4.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力的結(jié)果顯示:Control組和

6、Scrambled組兩側(cè)大量的細(xì)胞向線內(nèi)生長(zhǎng)，邊緣不整齊;而miR-200a Mimi、miR-141Mimi和Combined組細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)能力差，且Combined組細(xì)胞阻滯效果更明顯于miR-200a Mimi、miR-141Mimi組。
　　 5.Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蛋白表達(dá)的結(jié)果顯示:經(jīng)Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)miR-200a和miR-141后，與Control組和Scrambled組

7、相比，miR-200aMimi、miR-141Mimi和Combined組SGC7901細(xì)胞E-cadherin的表達(dá)增加，ZEB2、N-cadherin、MMP-9的表達(dá)減少，且Combined組的各個(gè)蛋白變化更顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6.細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示:免疫熒光染色結(jié)合激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，E-cadherin、N-cadherin、MMP-9均為胞漿表達(dá)的蛋白，ZEB2為胞核表達(dá)的蛋白。與

8、Control和Scrambled組比較，在miR-200a Mimi、miR-141 Mimi和Combined組中N-cadherin、MMP-9在細(xì)胞漿的表達(dá)和ZEB2在細(xì)胞核的表達(dá)均有明顯的下調(diào)，而E-cadherin在細(xì)胞質(zhì)的表達(dá)則增加，且在Combined組的各個(gè)蛋白變化更顯著。
　　 結(jié)論:
　　 1.上調(diào)miR-200a、miR-141的表達(dá)可抑制人胃癌細(xì)胞株SGC7901的增殖和侵襲遷移能力，且在兩者聯(lián)