MiR-200a和miR-141對人胃癌細胞株SGC7901生物學行為的影響及機制的研究.pdf

1、目的:探討轉(zhuǎn)染miR-200a mimics和miR-141 mimics對人胃癌細胞株SGC7901生物學行為的影響，包括細胞的增殖、侵襲和遷移，并探討其可能作用的機制。
　　 方法:應用脂質(zhì)體介導的寡聚核苷酸miR-200a mimics和miR-141mimics靶向單獨或聯(lián)合轉(zhuǎn)染人胃腺癌細胞株SGC7901，同時設未轉(zhuǎn)染組(Control)、無義序列轉(zhuǎn)染組(Scrambled)。應用Real time PCR檢測轉(zhuǎn)染后各

2、組miRNA的表達;MTT法檢測各組轉(zhuǎn)染后細胞的增殖活性;Transwell小室法和細胞劃痕實驗分別檢測轉(zhuǎn)染后細胞的侵襲和遷移能力的變化;Western blot實驗和細胞免疫熒光實驗檢測轉(zhuǎn)染后E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、E盒結(jié)合鋅指蛋白-2(ZEB2)、N-鈣黏蛋白(N-cadherin)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的表達變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.轉(zhuǎn)染48h后，Real time PCR結(jié)果顯示，

3、與Control和Scrambled組相比，miR-200aMimi、miR-141Mimi和Combined組細胞miRNA的表達水平均升高，且Combined組中miRNA的表達水平高于miR-200a Mimi、miR-141 Mimi組。結(jié)果證實轉(zhuǎn)染后成功調(diào)控了miR-200a、miR-141在人胃癌細胞株SGC7901中的表達，可滿足后續(xù)實驗的要求。
　　 2.MTT法檢測轉(zhuǎn)染后細胞增殖活性的結(jié)果顯示:與Control

4、和Scrambled組相比，miR-200a Mimi、miR-141Mimi和Combined組在轉(zhuǎn)染后2d細胞增殖能力明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而且轉(zhuǎn)染后2d Combined組細胞增殖能力明顯低于miR-200a Mimi、miR-141 Mimi組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3.Transwell小室實驗檢測細胞侵襲能力的結(jié)果顯示:miR-200a Mimi、miR-141 Mimi和C

5、ombined組的穿膜細胞數(shù)分別為76.33±3.79、65.33±4.72、29.67±2.08，明顯低于Control組（137.67±5.13）和Scrambled組（136.67±6.03），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且Combined組的細胞穿膜數(shù)明顯少于miR-200aMimi、miR-141 Mimi組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 4.細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力的結(jié)果顯示:Control組和

6、Scrambled組兩側(cè)大量的細胞向線內(nèi)生長，邊緣不整齊;而miR-200a Mimi、miR-141Mimi和Combined組細胞的遷移運動能力差，且Combined組細胞阻滯效果更明顯于miR-200a Mimi、miR-141Mimi組。
　　 5.Western blot實驗檢測蛋白表達的結(jié)果顯示:經(jīng)Western blot實驗檢測發(fā)現(xiàn)，過表達miR-200a和miR-141后，與Control組和Scrambled組

7、相比，miR-200aMimi、miR-141Mimi和Combined組SGC7901細胞E-cadherin的表達增加，ZEB2、N-cadherin、MMP-9的表達減少，且Combined組的各個蛋白變化更顯著，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 6.細胞免疫熒光結(jié)果顯示:免疫熒光染色結(jié)合激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，E-cadherin、N-cadherin、MMP-9均為胞漿表達的蛋白，ZEB2為胞核表達的蛋白。與

8、Control和Scrambled組比較，在miR-200a Mimi、miR-141 Mimi和Combined組中N-cadherin、MMP-9在細胞漿的表達和ZEB2在細胞核的表達均有明顯的下調(diào)，而E-cadherin在細胞質(zhì)的表達則增加，且在Combined組的各個蛋白變化更顯著。
　　 結(jié)論:
　　 1.上調(diào)miR-200a、miR-141的表達可抑制人胃癌細胞株SGC7901的增殖和侵襲遷移能力，且在兩者聯(lián)