ARK5基因沉默聯(lián)合5-氟尿嘧啶對胃癌細(xì)胞SGC7901生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：腫瘤細(xì)胞常因過度增殖導(dǎo)致其周邊的微環(huán)境處于缺血、缺氧的能量不足狀態(tài)，而研究發(fā)現(xiàn) ARK5參與腫瘤細(xì)胞對局部代謝變化的耐受過程，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活、侵襲和轉(zhuǎn)移。因此，本實驗擬構(gòu)建 ARK5-RNAi慢病毒載體，詳細(xì)探討ARK5基因沉默與5-FU聯(lián)合后對人胃癌細(xì)胞SGC7901生物學(xué)行為的影響。
　　方法：設(shè)計三條靶向ARK5基因的RNA干擾（RNA interference，RNAi）序列及一條陰性對照(negative c

2、ontrol，NC)序列，構(gòu)建重組慢病毒；用帶有熒光（GFP）的陰性對照慢病毒篩選慢病毒感染胃癌細(xì)胞 SGC7901的最佳條件，Western Blot檢測ARK5基因沉默效果，篩選出基因沉默效果最顯著的干擾靶點(diǎn)；MTT檢測ARK5基因沉默和5-FU聯(lián)合對SGC7901細(xì)胞增殖的抑制作用，確定抑制作用最明顯時的5-FU濃度，并將實驗分為6組:正常對照組（Control）、陰性對照組（NC）、ARK5-RNAi慢病毒感染組（ARK5-RN

3、Ai）、正常對照+5-FU組（Control+5-FU）、陰性對照+5-FU組（NC+5-FU）、ARK5-RNAi慢病毒感染+5-FU組（ARK5-RNAi+5-FU），用細(xì)胞劃痕實驗、Transwell小室侵襲實驗、流式細(xì)胞儀分別檢測各組細(xì)胞的遷移能力、侵襲能力和細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的情況，每組重復(fù)6次。
　　結(jié)果：⑴基因測序結(jié)果顯示：三種ARK5-RNAi重組慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建成功；⑵帶熒光的陰性對照慢病毒感染SGC7901的

4、結(jié)果表明：MOI值50，感染體系為ENI.S.+ Polybrene時，慢病毒感染SGC7901細(xì)胞的效果最佳；⑶Western Blot結(jié)果顯示：ARK5-RNAi-3重組慢病毒能明顯下調(diào)ARK5的蛋白表達(dá)，與NC組比較具有顯著性差異（p<0.01）；⑷MTT比色法檢測結(jié)果顯示，SGC7901的細(xì)胞生長抑制率隨5-FU濃度增加而增加；ARK5基因沉默和5-FU均能抑制胃癌細(xì)胞SGC7901的體外增殖，兩者聯(lián)合后，細(xì)胞的增殖抑制更明顯；

5、ARK5基因沉默與10μg／ml、20μg／ml、40μg／ml、80μg／ml、160μg／ml的5-FU聯(lián)用時均具有協(xié)同作用，5-FU40μg／ml濃度時此作用最大。⑸ARK5基因沉默后，ARK5-RNAi組細(xì)胞的體外遷移和侵襲能力較 Control組降低，細(xì)胞凋亡率增多，細(xì)胞周期被阻滯，結(jié)果均具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.01）；Control+5-FU組對SGC7901細(xì)胞的腫瘤生物學(xué)行為有相似的影響；ARK5-RNAi+5-FU