干擾Rab27A基因對胃癌細胞SGC7901生物學行為的影響.pdf

1、目的：失控性體外增殖、遷移和侵襲能力是腫瘤細胞的基本生物學特性，這與基因的異常表達有著密切的關系。前期的研究結果顯示，Rab27A基因在胃癌及癌旁正常組織中呈現(xiàn)差異性表達，并且其表達水平與患者臨床病理學特征及預后有明確的相關性。這就提示Rab27A基因很可能在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。但是，Rab27A基因對胃癌細胞惡性生物學特性的影響還有待深入研究。目的：研究干擾Rab27A基因對胃癌細胞增殖、遷移和侵襲能力的影響。
　　

2、方法：應用Western Blot技術驗證Rab27A基因在8對胃癌及癌旁組織中的差異性表達。采用RT-PCR和Western Blot技術檢測5個胃癌細胞系及1個永生化細胞系中Rab27A基因的表達水平，并從中篩選Rab27A高表達細胞株；以高表達Rab27A基因的SGC7901細胞為研究模型，通過細胞轉染，G418篩選，獲得候選RNA干擾穩(wěn)定細胞株，并通過RT-PCR，Western blot及免疫熒光標記等技術進行驗證；再經過MT

3、T實驗、平板克隆形成實驗、軟瓊脂集落形成實驗和Transwell實驗觀察干擾Rab27A后SGC7901細胞增殖，遷移及侵襲等生物學行為的改變。
　　結果：實驗結果表明，與癌旁正常組織相比，Rab27A基因在胃癌組織中呈現(xiàn)低表達（7/8，87.5％）；在5個胃癌細胞系和1個永生化細胞系中Rab27A基因呈現(xiàn)差異性表達。選擇高表達Rab27A基因的SGC7901細胞為研究模型，轉染RNAi-2/3干擾質粒抑制SGC7901細胞中Ra

4、b27A mRNA和蛋白的表達。Rab27A干擾穩(wěn)定細胞株干擾效率鑒定結果：與Vector相比，RNAi-2/3表達量明顯下降。MTT實驗、平板克隆形成實驗和軟瓊脂集落形成實驗結果顯示，干擾Rab27A對胃癌細胞SGC7901的細胞生長曲線、克隆形成數(shù)量及克隆形成大小沒有顯著影響（P>0.05）。Transwell實驗結果表明，干擾Rab27A表達后的細胞穿過基膜或基質膠的數(shù)量明顯增多（P<0.05），細胞的遷移和侵襲能力顯著提高。

5、r>　　結論：綜上所述，Rab27A在5個胃癌細胞系及1個永生化細胞系中呈現(xiàn)差異性表達；Rab27A基因對胃癌細胞的生物學特性有重要影響，其干擾后可以增強胃癌細胞的遷移和侵襲能力，卻不影響胃癌細胞的增殖能力。這也提示在胃癌中Rab27A很可能是一種抑癌基因，可以作為潛在的腫瘤預后標記物，為今后的臨床診斷治療及預后提供重要的參考價值。至今為止，人們對于腫瘤的認識非常有限，更多的基因、效應因子、信號通路以及分子機制仍需被發(fā)現(xiàn)。這不僅可以提升