MiR-346對(duì)前列腺癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響及其可能機(jī)制的探討.pdf

1、目的：控制前列腺癌細(xì)胞中 miR-346的表達(dá)，研究促進(jìn)及抑制 miR-346的表達(dá)對(duì)去勢(shì)抵抗型人前列腺癌DU-145、PC-3細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移及侵襲能力的影響，初步探討干擾 miR-346表達(dá)對(duì)前列腺癌細(xì)胞上皮及間質(zhì)標(biāo)記物表達(dá)變化的影響并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：以去勢(shì)抵抗型人前列腺癌DU145、PC-3細(xì)胞株為研究對(duì)象，分別轉(zhuǎn)染人工合成的miR-346的模擬物(miR-346 mimics)及反義體(inhibitor

2、miR-346)，在細(xì)胞中過(guò)表達(dá)或沉默miR-346，劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)研究改變miR-346表達(dá)后DU145、PC-3細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移及侵襲能力的改變，并使用Western blot法在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）陽(yáng)性的DU-145細(xì)胞中檢測(cè)miR-346表達(dá)改變后上皮標(biāo)志物 E-cadherin以及間質(zhì)標(biāo)記物 N-cadherin的蛋白表達(dá)變化。mi

3、R-346可以調(diào)控TGFβ/smad信號(hào)通路里SMAD3、SMAD4的表達(dá)，采取Q-PCR法及Western blot法分別在mRNA及蛋白水平檢測(cè)SMAD3、SMAD4在過(guò)表達(dá)或沉默miR-346后的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：miR-346 mimics組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力明顯增強(qiáng)，inhibitor miR-346組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力顯著降低。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：DU145細(xì)胞NC組從上室遷移過(guò)膜的細(xì)胞數(shù)為57±5.7個(gè)，

4、miR-346 mimics組192±18.5個(gè)，inhibitor NC組53±4.3個(gè)，inhibitor miR-346組16±1.3個(gè)；PC-3細(xì)胞NC組從上室遷移過(guò)膜的細(xì)胞數(shù)為29±2.7個(gè)，miR-346 mimics組90±8.5個(gè)，inhibitor NC組34±3.0個(gè)，inhibitor miR-346組12±0.9個(gè)。在DU145和PC-3細(xì)胞中miR-346 mimics組與NC組相比，細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)，in

5、hibitor miR-346組與inhibitor NC相比，細(xì)胞遷移能力顯著減弱，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)顯示：DU145細(xì)胞NC組從上室侵襲過(guò)膜的細(xì)胞數(shù)為38±3.7個(gè)，miR-346 mimics組98±8.5個(gè)，inhibitor NC組37±3.3個(gè)，inhibitor miR-346組7±0.5個(gè)；PC-3細(xì)胞NC組從上室侵襲過(guò)膜的細(xì)胞數(shù)為33±2.8個(gè)，miR-346 mimic

6、s組90±8.2個(gè)，inhibitor NC組35±3.1個(gè)，inhibitor miR-346組2±0.1個(gè)。在DU145和PC-3細(xì)胞中miR-346 mimics組與NC組相比，細(xì)胞侵襲能力明顯增強(qiáng)，inhibitor miR-346組與inhibitor NC相比，細(xì)胞侵襲能力顯著減弱，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)EMT陽(yáng)性的DU145細(xì)胞株進(jìn)一步研究，Western blot結(jié)果顯示，miR-346

7、 mimics組上皮標(biāo)志物 E-cadherin的蛋白表達(dá)降低；間質(zhì)標(biāo)記物 N-cadherin的蛋白表達(dá)升高，inhibitor miR-346組上皮標(biāo)志物E-cadherin的蛋白表達(dá)增高；間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin的蛋白表達(dá)降低。對(duì)兩種細(xì)胞進(jìn)一步研究，Q-PCR和Western blot結(jié)果顯示miR-346 mimics組SMAD3、SMAD4的mRNA及蛋白表達(dá)降低，inhibitor miR-346組SMAD3、SMAD

8、4的mRNA及蛋白表達(dá)升高。
　　結(jié)論：去勢(shì)抵抗型人前列腺癌DU145、PC-3細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、遷移及侵襲的能力與細(xì)胞中 miR-346表達(dá)水平高度相關(guān)；上皮標(biāo)記物 E-cadherin的蛋白表達(dá)與 miR-346的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin的蛋白表達(dá)與miR-346的表達(dá)呈正相關(guān)，即miR-346促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，進(jìn)而促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力；miR-346抑制smad3及smad4的表達(dá)，可能