Prohibitin2促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞遷移機(jī)制的探究.pdf

1、目的：PHB2是蛋白抑制素家族(Prohibitin)中的一員，在很多腫瘤中高表達(dá)。PHB2是一種多功能的蛋白，既參與雌激素受體相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄又在線粒體中發(fā)揮著重要作用。前期實(shí)驗(yàn)證明，PHB2在很多癌癥組織中高表達(dá)，且與腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲有關(guān)。因此本實(shí)驗(yàn)預(yù)探究PHB2參與前列腺癌腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的機(jī)制以及其在此過程中所扮演的角色，為進(jìn)一步解釋前列腺癌侵襲和遷移機(jī)制提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：(1)體外培養(yǎng)不同類型的前列腺上皮細(xì)胞系

2、，通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測不同惡性程度的前列腺上皮細(xì)胞系中PHB2的差表達(dá)。(2) PHB2促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞遷移:克隆PHB2的表達(dá)質(zhì)粒，并合成PHB2的siRNA，前列腺癌細(xì)胞系PC3和DU145分別轉(zhuǎn)染該表達(dá)質(zhì)粒和PHB2的siRNA，通過劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測過表達(dá)和敲除PHB2對(duì)細(xì)胞遷移的影響。(3) PHB2調(diào)節(jié)Akt2的表達(dá):用Western Blot的方法檢測過表達(dá)和抑制PHB2后，Akt2的蛋白表達(dá)變化情況，并加入放線

3、菌酮檢測PHB2對(duì)Akt2蛋白穩(wěn)定性的影響。(4)通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測過表達(dá)或干擾PHB2表達(dá)后，檢測PHB2是否通過表觀遺傳學(xué)修飾調(diào)控腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：PHB2與前列腺癌惡性進(jìn)展呈正相關(guān)，前列腺癌細(xì)胞系PC3和DU145中PHB2的表達(dá)量明顯高于正常前列腺上皮細(xì)胞系。與對(duì)照相比，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PHB2表達(dá)質(zhì)粒的前列腺癌細(xì)胞系PC3和DU145的遷移能力明顯增加，Akt2的蛋白表達(dá)量降低;抑制PHB2的表達(dá)

4、后，前列腺癌細(xì)胞系PC3和DU145的遷移能力減弱，Akt2的蛋白表達(dá)量增加，即PHB2負(fù)調(diào)節(jié)Akt2的蛋白表達(dá)，而對(duì)其mRNA水平的調(diào)節(jié)不明顯。并且干擾PHB2的表達(dá)后能增加Akt2的蛋白穩(wěn)定性。另外，PHB2可抑制腫瘤抑制基因TFPI2和p21的表達(dá)。
　　結(jié)論：PHB2在前列腺癌惡性進(jìn)程中發(fā)揮著重要作用。PHB2可能通過調(diào)節(jié)Akt2的蛋白穩(wěn)定性、增加其表達(dá)量，促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞系PC3和DU145的遷移。與此同時(shí)，PHB2可抑