PARP1對(duì)前列腺癌PC3細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響.pdf

1、目前，前列腺癌是一個(gè)嚴(yán)峻的全球性疾病。前列腺癌主要好發(fā)于老年男性，且發(fā)病率隨著老年男性的年齡增長而增長。前列腺癌在歐美地區(qū)是常見腫瘤之一，在男性惡性腫瘤中發(fā)病率第一，死亡率僅次于肺癌而位居第二。我國前列腺癌發(fā)病率雖然低于歐美地區(qū)，但是近年來發(fā)病率明顯上升。原因可能來自于以下幾方面：中國人口老齡化、社會(huì)生活及醫(yī)療各方面的改善導(dǎo)致人均壽命延長、生活環(huán)境改變、飲食結(jié)構(gòu)的變化。
　　前列腺癌中的病理類型以腺癌多見，大多數(shù)前列腺癌發(fā)生在外周

2、帶。目前前列腺癌治療的主要方法有：手術(shù)根治、放射治療、內(nèi)分泌治療等。因前列腺癌對(duì)放療及化療不敏感。雖然早期前列腺癌行手術(shù)治療預(yù)后良好，但多數(shù)前列腺癌患者就診時(shí)已中晚期，失去根治性手術(shù)機(jī)會(huì)，只能用雄激素阻斷為主的內(nèi)分泌綜合治療。但是多數(shù)患者會(huì)進(jìn)展為去勢(shì)抵抗性前列腺癌?，F(xiàn)對(duì)該類患者的療效較差，最后患者隨疾病進(jìn)展而死亡。
　　近年來隨著對(duì)前列腺癌的深入研究，發(fā)現(xiàn)前列腺癌是一個(gè)多機(jī)制、多基因的復(fù)雜過程。目前關(guān)于前列腺的發(fā)生、進(jìn)展、侵襲轉(zhuǎn)移

3、等機(jī)制仍然不明確。在我們?cè)缙谘芯恐校覀兺ㄟ^免疫組化檢測PARP1在前列腺癌組織和良性前列腺增生組織中的表達(dá)情況。相對(duì)于良性前列腺增生，前列腺癌組織中的PARP1表達(dá)水平明顯高于良性前列腺增生組織。我們前期細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)PARP1和前列腺癌細(xì)胞的增殖凋亡有關(guān)。免疫組化結(jié)果提示PARP1的陽性表達(dá)可能是預(yù)測前列腺癌一種潛在分子標(biāo)記物或治療靶點(diǎn)，同時(shí) PARP1在前列腺癌中高表達(dá)也提示PARP1可能在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。目前關(guān)

4、于PARP1在前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的研究很少，具體機(jī)制不明。
　　目的:
　　本研究擬通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討PARP1對(duì)前列腺癌PC3細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響，闡明其作用并初步探討其機(jī)制，為研究前列腺癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制及治療策略提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1、采用特異性 siRNA沉默 PARP1表達(dá)，分別采用劃痕實(shí)驗(yàn)、侵襲小室觀察沉默PARP1表達(dá)后前列腺癌PC3細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力變化。用Western Blot檢測

5、PARP1對(duì)侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的影響。進(jìn)一步用 G418篩選建立轉(zhuǎn)染質(zhì)粒穩(wěn)定沉默PARP1表達(dá)PC3細(xì)胞株，用Western Blot檢驗(yàn)穩(wěn)定細(xì)胞株內(nèi)PARP1表達(dá)情況。
　　2、BALB/c裸鼠皮下種植轉(zhuǎn)染pGPU6/GFP/Neo PARP1-homo-NC/1706重組質(zhì)粒的PC3細(xì)胞及空白對(duì)照的PC3細(xì)胞，觀察各組移植瘤生長狀況并行HE染色觀察細(xì)胞惡性程度及免疫組織化學(xué)觀察 PARP1對(duì)前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的影響。

6、>　　結(jié)果:
　　1、特異性siRNA沉默PC3細(xì)胞株P(guān)ARP1蛋白表達(dá)
　　Western Blot檢測PARP1蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果顯示特異性siRNA可有效沉默PARP1的表達(dá)。
　　2、PARP1表達(dá)沉默后前列腺癌PC3細(xì)胞遷移能力減弱
　　劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，沉默PRAP1后可顯著抑制前列腺癌PC3細(xì)胞遷移能力，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并且siRNA抑制前列腺癌PC3細(xì)胞遷移能力和

7、PARP1抑制效果呈正相關(guān)。
　　3、PARP1表達(dá)沉默后前列腺癌PC3細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力減弱
　　Transwell實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，沉默PRAP1后可顯著抑制前列腺癌PC3細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4、沉默PARP1后前列腺癌PC3細(xì)胞EMT分子標(biāo)記物表達(dá)情況
　　Westernblot結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，沉默PRAP1后可顯著抑制前列腺癌 PC

8、3細(xì)胞 Vimentin的表達(dá)，沉默 PRAP1后可顯著上調(diào)E-cadherin的表達(dá)。
　　5、成功構(gòu)建沉默PARP1表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株
　　RT-PCR、Western Blot結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染穩(wěn)定沉默PARP1表達(dá)的質(zhì)粒后可顯著抑制PARP1的表達(dá)。
　　6、裸鼠移植瘤生長狀況觀察結(jié)果
　　裸鼠移植瘤生長狀況監(jiān)測結(jié)果提示：實(shí)驗(yàn)組的腫瘤明顯小于空白對(duì)照組及空載對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組瘤體體積及濕重顯著小于空白對(duì)照組及陰性對(duì)

9、照組。
　　7、裸鼠移植瘤組織HE染色
　　HE染色結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組HE染色與空白組、空載組相比：裸鼠移植瘤PC3細(xì)胞體積小、細(xì)胞胞漿少、細(xì)胞核小且顏色較淡、細(xì)胞核呈圓形、核仁明顯、核/漿比例增小、間質(zhì)少，間質(zhì)內(nèi)血管數(shù)量較少。
　　8、裸鼠移植瘤瘤體中EMT分子標(biāo)志物表達(dá)情況
　　裸鼠移植瘤瘤體免疫組織化學(xué)及RT-PCR、Western blot結(jié)果顯示：與對(duì)照組及空載組比較，實(shí)驗(yàn)組的E-cadherin表達(dá)上調(diào)

10、，Vimentin的表達(dá)下調(diào)。
　　9、沉默PARP1對(duì)IGF1R/Akt/GSK-3β信號(hào)通路影響
　　沉默PARP1可顯著抑制IGF1R/ Akt/ GSK-3β信號(hào)通路，提示PARP1可能通過該通路引起前列腺癌PC3細(xì)胞發(fā)生EMT。
　　結(jié)論:
　　1、特異性siRNA可有效沉默內(nèi)源性PARP1的表達(dá)。同時(shí)能成功構(gòu)建沉默PARP1表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株。
　　2、沉默PARP1表達(dá)可顯著抑制前列腺癌PC3細(xì)