雙色熒光示蹤肝癌模型的特性分析及miR-146b-5p影響肝癌細胞增殖、遷移能力的實驗研究.pdf

1、第一部分雙色熒光示蹤肝癌模型的特性分析
　　目的：建立紅、綠雙色熒光示蹤肝癌動物模型并對其腫瘤生物學(xué)特性進行分析。
　　方法：采用直接注射法將帶有紅色熒光的肝癌細胞接種于綠色熒光裸鼠肝葉內(nèi)，建立紅、綠雙色熒光示蹤肝癌動物模型。小動物活體熒光成像儀實時觀察肝癌的生長轉(zhuǎn)移情況。處死荷瘤鼠，對其進行大體解剖。取移植瘤做冰凍切片，顯微鏡下觀察移植瘤的組織結(jié)構(gòu)特征。同時取移植瘤和腹水原代培養(yǎng)，移植瘤做免疫組織化學(xué)染色，分析腫瘤相關(guān)蛋白

2、表達。
　　結(jié)果：成功建立了雙色熒光示蹤肝癌動物模型。本模型可以模擬出肝癌侵襲、轉(zhuǎn)移、癌性腹水等肝癌生物學(xué)特征。熒光成像可檢測到腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移。冰凍切片可觀察到肝癌組織的構(gòu)建過程，肝癌細胞與宿主細胞的融合現(xiàn)象也清晰可見。免疫組化結(jié)果顯示腫瘤相關(guān)蛋白PDGFRɑ、pSTAT3、IRAK1、MMP9、N-RAS在肝癌組織中表達。
　　結(jié)論：本方法建立的雙色熒光示蹤肝癌動物模型穩(wěn)定可靠、易重復(fù)。該模型可直接觀察到腫瘤組織重建過程

3、中肝癌細胞與宿主細胞間的相互作用，進一步闡明了腫瘤微環(huán)境在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　第二部分 miR-146b-5p影響肝癌細胞增殖、遷移能力的實驗研究
　　目的：檢測miR-146b-5p在肝癌細胞中的表達情況，研究其對肝癌細胞增殖、遷移能力的影響并初步探討其發(fā)揮作用的機制。
　　方法：Real-time RT-PCR方法檢測肝癌細胞和正常肝細胞中miR-146b-5p的表達水平。通過CCK-8實驗、平板克隆形成實

4、驗、Transwell遷移實驗、劃痕實驗檢測觀察過表達miR-146b-5p對肝癌細胞的增殖、遷移能力的影響。應(yīng)用生物學(xué)信息軟件預(yù)測miR-146b-5p可能作用的靶基因，并用Western blot方法進行靶基因驗證。
　　結(jié)果：miR-146b-5p在肝癌細胞中較正常肝細胞出現(xiàn)低表達，轉(zhuǎn)染miR-146b-5p mimics后的肝癌細胞增殖、遷移能力下降，Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-146b-5p mimics