靜壓力對(duì)PLGA-膠原支架上牙齦成纖維細(xì)胞整合素α5和整合素β1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:利用重物加載模型，對(duì)PLGA-膠原支架上牙齦成纖維細(xì)胞(HGFs)施加持續(xù)靜壓力，探索復(fù)合三維培養(yǎng)的HGFs在不同作用時(shí)間點(diǎn)下細(xì)胞膜表面整合素α5、β1表達(dá)變化情況，初步探討整合素在復(fù)合培養(yǎng)的HGFs早期力學(xué)響應(yīng)機(jī)制中的作用。
　　方法:1、采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)HGFs，并進(jìn)行細(xì)胞來源鑒定，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)細(xì)胞;2、將HGFs制成1×105個(gè)/ml細(xì)胞懸液，接種于PLGA-膠原支架與無膠原修飾的PLGA支架上，在接種6小時(shí)

2、后，比較兩者細(xì)胞接種率，接種后第5天對(duì)兩者進(jìn)行熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡觀察，并采用CCK-8法檢測(cè)接種后第1、2、3、5、7天時(shí)兩者細(xì)胞增殖活性;3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同靜壓力(0、5、15、25、35g/cm2)作用24小時(shí)后，對(duì)復(fù)合三維培養(yǎng)HGFs細(xì)胞周期的影響，確定最適加載力值。4、采用最適加載力值對(duì)復(fù)合三維培養(yǎng)HGFs施加靜壓力，作用0、1、3、6、12小時(shí)，并設(shè)置各時(shí)間點(diǎn)空白對(duì)照組，分別采用RT-qPCR和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)整合

3、素α5和β1的mRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1、體外成功培養(yǎng)HGFs，取4-6代增長(zhǎng)活躍、性狀穩(wěn)定的HGFs用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);2、PLGA-膠原支架細(xì)胞接種率高于無膠原修飾PLGA支架，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、熒光顯微鏡下，兩種PLGA支架上均可見大量胞核大小均一、圓形或橢圓形的細(xì)胞生長(zhǎng)。同一倍數(shù)視野下，PLGA-膠原支架上HGFs數(shù)量多于無膠原修飾的PLGA支架。4、共聚焦顯微鏡下，兩種支架上均可見細(xì)胞沿支架密集生長(zhǎng)，細(xì)胞相互聯(lián)

4、系成整體。分層掃描可見，不同層面均有細(xì)胞存在。5、CCK-8結(jié)果顯示:兩種支架上，細(xì)胞呈相同增長(zhǎng)趨勢(shì)，均于第3天開始進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，至第5天達(dá)到峰值，而第7天時(shí)，細(xì)胞數(shù)量出現(xiàn)回落。在各天數(shù)時(shí)，PLGA-膠原支架上細(xì)胞數(shù)量均高于無膠原修飾PLGA支架。6、適宜范圍內(nèi)（0-25g/cm2）靜壓力可提高三維培養(yǎng)HGFs的增殖活性，而過大的靜壓力(35g/cm2)不利于促進(jìn)細(xì)胞增殖活性，并對(duì)細(xì)胞造成較大損傷。25g/cm2更接近與本三維培養(yǎng)模型

5、的最適加載力值。7、當(dāng)25g/cm2靜壓力作用于三維培養(yǎng)的HGFs，整合素α5 mRNA和蛋白表達(dá)迅速出現(xiàn)上調(diào)，在3小時(shí)達(dá)峰值，后出現(xiàn)回落，但在12小時(shí)表達(dá)量仍高于未加力組。整合素β1mRNA和蛋白表達(dá)趨勢(shì)與整合素α5相似，但其在6小時(shí)達(dá)到峰值，且各小時(shí)表達(dá)量均高于整合素α5。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建HGFs的三維培養(yǎng)模型，利用重物加載模型，確定25g/cm2為本復(fù)合培養(yǎng)模型的最適加載力值，并證實(shí)了靜壓力作用下三維培養(yǎng)HGFs整