兒童功能性便秘的流行病學(xué)調(diào)查、功能分類及部分類型的病理生理基礎(chǔ)研究.pdf

1、本研究從兒童最常見(jiàn)而且尚未解決的問(wèn)題入手，首先對(duì)中國(guó)北方具有代表性的城市兒童進(jìn)行大范圍的流行病學(xué)調(diào)查，探討北方兒童便秘的患病率，并在調(diào)查的基礎(chǔ)上提出我國(guó)兒童便秘的診斷標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)用PCR-SSCP和BOX-PCR技術(shù)對(duì)正常腸道菌群進(jìn)行DNA指紋圖譜分析，觀察腸道菌群在正常和便秘兒童腸道中的分布比例關(guān)系并結(jié)合應(yīng)用氣相色譜技術(shù)觀察細(xì)菌代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸在正常和便秘兒童腸道中的分布比例關(guān)系，探討腸道菌群及其代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸在兒童功能性便秘發(fā)病中

2、的作用。 材料和方法： 一、流行病學(xué)調(diào)查 應(yīng)用分層、整群隨機(jī)抽樣方法對(duì)中國(guó)北方5市(包括北京、天津、沈陽(yáng)、吉林和哈爾濱)常住兒童中2～14歲的兒童進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查，調(diào)查問(wèn)卷由專門(mén)從事流行病學(xué)調(diào)查的專家協(xié)助設(shè)計(jì)，首先進(jìn)行預(yù)調(diào)查，然后進(jìn)行普查，共發(fā)放問(wèn)卷20000份，其中北京6000份，天津4000份，沈陽(yáng)4500份，哈爾濱3000份，長(zhǎng)春2500份，根據(jù)普查結(jié)果了解按兒童羅馬Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)判斷的FC的檢出率，再對(duì)篩出的部分人在

3、醫(yī)院進(jìn)行精查(結(jié)腸傳輸試驗(yàn)，鋇灌腸及排便造影，消化道測(cè)壓)以排除結(jié)腸器質(zhì)性疾病，計(jì)算我國(guó)北方城市兒童兒童功能性便秘的患病率。詳細(xì)記錄與兒童功能性便秘有關(guān)的各種危險(xiǎn)因素以及與排便有關(guān)的各種相關(guān)癥狀，對(duì)各種危險(xiǎn)因素與兒童功能性便秘的關(guān)系進(jìn)行逐步logistic回歸分析，分析其對(duì)于兒童功能性便秘的貢獻(xiàn)；按兒童羅馬Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)篩選確定便秘組，分析各相關(guān)癥狀在便秘組和非便秘組發(fā)生的頻率，用卡方對(duì)單因素進(jìn)行比較，再對(duì)有意義的癥狀用logistic回歸模型

4、作擬合優(yōu)度檢測(cè)，探討兒童功能性便秘的危險(xiǎn)因素，初步制定適合我國(guó)兒童的便秘標(biāo)準(zhǔn)。 二、排便功能檢測(cè) 研究對(duì)象分為對(duì)照組和便秘組。對(duì)照組33例，平均年齡5歲；便秘組96例，平均年齡6.5歲，均符合兒童功能性便秘羅馬Ⅱ診斷標(biāo)準(zhǔn)；聯(lián)合應(yīng)用結(jié)腸傳輸試驗(yàn)，X線排便造影和肛門(mén)直腸測(cè)壓對(duì)對(duì)照組和便秘組兒童進(jìn)行全面檢查，分析其影像學(xué)及功能學(xué)表現(xiàn)的差異，探討這些異常在兒童功能性便秘的病理生理及其對(duì)便秘的診斷和分型的意義； 三、慢傳輸

5、性便秘兒童結(jié)腸壁內(nèi)FAAH的表達(dá)及意義 研究對(duì)象分為便秘組和對(duì)照組，對(duì)照組16例，其中男10例，女6例，平均年齡7.5歲。便秘組男15例，女7例，平均年齡7歲，均符合STC的標(biāo)準(zhǔn)，分別取上述病例結(jié)腸標(biāo)本，按部位分為升、降和乙狀結(jié)腸，其中對(duì)照組升結(jié)腸5例，降結(jié)腸3例，乙狀結(jié)腸8例；便秘組升結(jié)腸4例，降結(jié)腸18例，乙狀結(jié)腸22例；應(yīng)用免疫組化，Western blotting，Real Time PCR對(duì)便秘組和對(duì)照組兒童結(jié)腸壁內(nèi)F

6、AAH的表達(dá)分析，探討FAAH在正常結(jié)腸壁內(nèi)的定位和定量表達(dá)及其意義，并聯(lián)合應(yīng)用免疫熒光雙重染色技術(shù)觀察FAAH與CB1受體的位置與分布，探討FAAH在生理?xiàng)l件下對(duì)結(jié)腸功能進(jìn)行調(diào)控的作用機(jī)制；同時(shí)還進(jìn)一步聯(lián)合應(yīng)用高壓液相色譜技術(shù)對(duì)便秘組兒童結(jié)腸壁內(nèi)FAAH的生物活性進(jìn)行定量檢測(cè)和分析，探討其在兒童功能性便秘發(fā)病中的作用。 四、功能性便秘兒童腸道菌群DNA指紋圖譜的建立及意義 研究對(duì)象分為對(duì)照組和便秘組，采用兒童功能性便秘

7、羅馬Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)確立便秘組，便秘組15例，男9例，女6例，平均年齡6.5歲；對(duì)照組35例，男24例，女11例，平均年齡6歲。取對(duì)照組和便秘組所有兒童糞便標(biāo)本進(jìn)行分析。應(yīng)用糞便細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取糞便細(xì)菌基因組DNA，分別應(yīng)用細(xì)菌16S rDNA的V3區(qū)引物和BOX基因組重復(fù)序列的引物BOX 1R進(jìn)行擴(kuò)增，然后進(jìn)行電泳和圖像分析，分別建立基于16SrDNA和BOX基因組重復(fù)序列的糞便細(xì)菌DNA指紋圖譜，探討PCR-SSCP和BOX-P

8、CR對(duì)于糞便細(xì)菌的分離效果及其對(duì)糞便細(xì)菌菌種鑒定的意義；將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆測(cè)序，測(cè)序后對(duì)序列的同源性在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中使用BLAST工具進(jìn)行比較，初步確定細(xì)菌的種屬和分類，探討腸道菌群在功能性便秘兒童的變化趨勢(shì)及其對(duì)便秘產(chǎn)生的意義。 五、功能性便秘兒童糞便短鏈脂肪酸的檢測(cè)與分析 應(yīng)用氣相色譜技術(shù)對(duì)便秘組和對(duì)照組兒童糞便中短鏈脂肪酸的含量進(jìn)行定量檢測(cè)，分析短鏈脂肪酸在功能性便秘兒童腸道內(nèi)的變化趨勢(shì)，進(jìn)一步探討腸道微生

9、態(tài)菌落及其代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸在兒童功能性便秘發(fā)病中的意義。 結(jié)論： (1)兒童FC是兒童期的常見(jiàn)病多發(fā)病，好發(fā)于2～3歲兒童；人工喂養(yǎng)、添加輔食過(guò)早、飲食纖維低、挑食偏食、排便恐懼、抑郁、焦慮、體重、遺傳、高經(jīng)濟(jì)收入可能是FC的危險(xiǎn)因素，應(yīng)該對(duì)民眾進(jìn)行廣泛的宣教做針對(duì)性預(yù)防和治療。 (2)我國(guó)兒童FC的癥狀學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)為：①排便次數(shù)<3次/周；②大便干硬成團(tuán)塊狀；③排便費(fèi)力；④需要瀉藥協(xié)助排便。具備上述的4個(gè)診斷標(biāo)

10、尺中2條者，癥狀持續(xù)至少2月即可診斷便秘。 (3)兒童功能性便秘可以分為以下幾種類型：①慢傳輸型便秘，近端結(jié)腸各節(jié)段傳輸功能異常。②出口梗阻型便秘：結(jié)腸出口處肛門(mén)直腸區(qū)域存在動(dòng)力異常。③混合型便秘：同時(shí)存在結(jié)腸傳輸障礙和出口動(dòng)力異常；聯(lián)合應(yīng)用結(jié)腸傳輸時(shí)間，X線排便造影和肛門(mén)直腸測(cè)壓對(duì)兒童功能性便秘的病因診斷和臨床分型具有重要意義。 (4)人類正常結(jié)腸壁內(nèi)無(wú)論是蛋白還是核酸水平均存在FAAH的表達(dá)，F(xiàn)AAH主要表達(dá)在結(jié)腸肌

11、間神經(jīng)叢的神經(jīng)元內(nèi)和腸粘膜表面的吸收細(xì)胞和腺體內(nèi)，在肌間神經(jīng)叢內(nèi)FAAH的分布與CB1受體呈對(duì)應(yīng)趨勢(shì)。 (5)慢傳輸性便秘兒童結(jié)腸壁內(nèi)FAAH的表達(dá)減低，水解活性減弱，F(xiàn)AAH可能參與了慢傳輸性便秘的發(fā)生。 (6)功能性便秘兒童腸道菌群的菌屬多樣性增加，腸道內(nèi)存在與正常兒童相似的常駐菌，但優(yōu)勢(shì)菌種不同，各腸道菌屬間存在比例失調(diào)。 (7)功能性便秘兒童糞便中的短鏈脂肪酸含量減少，比例失調(diào)，功能性便秘的產(chǎn)生可能與腸道