鵝卵泡差異顯示表達序列標簽（ESTs）的篩選及分析.pdf

1、本研究以產(chǎn)蛋期揚州鵝為研究材料，采Oligo(dT<,10>)M(A/G/C)為錨定引物與23個隨機引物之間共69個組合的RT-PCR反應(yīng)對成熟卵泡總RNA進行DDRT-PCR分析，并利用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)合銀染技術(shù)分離DDRT-PCR產(chǎn)物，共獲得差異條帶18條。經(jīng)過PCR再擴增、電泳檢測和純化，共得到差異顯示的cDNA片段10條。經(jīng)二次PCR與第一次PCR結(jié)果比較，再經(jīng)Dot-blot驗證后得到7條差異表達cDNA片段，委托上

2、海杰瑞生物工程有限公司克隆測序，獲得5個表達序列標簽，且經(jīng)1.5％瓊脂糖電泳檢測顯示這些條帶比非差異顯示條帶弱，推測差異表達的基因表達豐度低。 五個差異顯示ESTs去除載體序列后用Blast檢索發(fā)現(xiàn)：在這5條差異表達片段中，EST YZGF01與人甲硫氨酸腺苷基轉(zhuǎn)移酶Ⅱ(MATⅡ)同源，同源性為95％，EST YZGF02與雞mKIAA0840 protein基因同源，同源性為94％。其余EST_YZGF03、EST_YZGF0