廣西巴馬小型豬卵泡抑素（Follistatin）的cDNA克隆、序列分析及原核表達(dá).pdf

1、 本研究根據(jù)GeneBank(NCBI)中的FS基因編碼區(qū)序列，設(shè)計(jì)并合成了一對(duì)特異性引物。上游引物：5'-ATGGTCCGTCCCAAGC-3'，對(duì)應(yīng)于FS基因編碼區(qū)第1-16位核苷酸；下游引物:5'-TTACCACTCTAGAATAGAAGATATAGG-3'，對(duì)應(yīng)于FS基因編碼區(qū)第1008-1035位核苷酸。以巴馬小型豬的卵巢組織總RNA為模板，利用M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶，通過反向聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)從豬卵巢的mRNA中擴(kuò)增出相應(yīng)的c

2、DNA片段。該擴(kuò)增片段經(jīng)純化后，連接到pMD18-T載體上擴(kuò)增測序。 使用添加酶切位點(diǎn)的引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增獲得FS基因，用BamH I和Sal I雙酶切后，定向插入到原核表達(dá)載體pET 32a+多克隆位點(diǎn)中，構(gòu)建pET-Fo原核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21。重組質(zhì)粒pET-Fo經(jīng)過鑒定后，用I PTG誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE和Western Blotting分析，證明已成功地表達(dá)了FS的融合蛋白(約58KD)，此融合蛋白以包