淇河鯽生長(zhǎng)激素全長(zhǎng)cDNA的克隆、序列分析及真核表達(dá).pdf

1、在我國(guó)淡水養(yǎng)殖已有2000多年的歷史，淡水養(yǎng)殖在我們的生活中占有很重要的地位。淇河鯽是產(chǎn)于河南省淇河的自然三倍體雌核發(fā)育鯽魚(yú)，以生長(zhǎng)快、味道美和效益高等優(yōu)點(diǎn)而久負(fù)盛名，具有良好的開(kāi)發(fā)前景。為了提高其生長(zhǎng)速度，縮短養(yǎng)殖周期，為市場(chǎng)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，促進(jìn)淇河鯽養(yǎng)殖業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展，目前急需研制安全高效的新型魚(yú)用生長(zhǎng)促進(jìn)劑來(lái)促進(jìn)生長(zhǎng)和保證食品安全。 魚(yú)類生長(zhǎng)激素是由腦垂體分泌的多肽類激素，參與魚(yú)類的生長(zhǎng)、發(fā)育、代謝、食欲和滲透壓的調(diào)節(jié)，廣

2、泛應(yīng)用于魚(yú)類內(nèi)分泌學(xué)、攝食和食物轉(zhuǎn)化效率、生長(zhǎng)等的研究。但是由于天然生長(zhǎng)激素難以大量獲得，限制了其功能和應(yīng)用研究。另一方面外源生長(zhǎng)激素在魚(yú)體內(nèi)分解消失快，不會(huì)在魚(yú)體中積累，這一結(jié)果提示，重組生長(zhǎng)激素蛋白的應(yīng)用可能以本原動(dòng)物來(lái)源的為好。 本試驗(yàn)進(jìn)行了淇河鯽生長(zhǎng)激素基因cDNA的克隆與序列分析，推導(dǎo)出蛋白質(zhì)序列并與其他魚(yú)類的生長(zhǎng)激素進(jìn)行了同源性比較和進(jìn)化系統(tǒng)分析，為從分子水平上了解淇河鯽生長(zhǎng)規(guī)律打下基礎(chǔ)。在真核表達(dá)實(shí)驗(yàn)中，根據(jù)已取得

3、的淇河鯽生長(zhǎng)激素的序列全長(zhǎng)，在開(kāi)放性閱讀框架兩端設(shè)計(jì)特異引物，用RT-PCR擴(kuò)增，得到大小為633bp的一個(gè)產(chǎn)物，進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證，完全在前測(cè)定序列的開(kāi)放性閱讀框架內(nèi)。將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5a中進(jìn)行克隆，用PCR初步篩選出重組子，以EcoRI，SnaBI雙酶切做進(jìn)一步鑒定后，將重組子命名為PPIC9K-GH，并進(jìn)行序列測(cè)定為下一步實(shí)驗(yàn)提供重組子。重組質(zhì)粒經(jīng)線性化等處理，電擊轉(zhuǎn)化導(dǎo)入畢赤酵母GS115中，經(jīng)MD、G418篩選得到高抗