南方鲇生長激素受體cDNA的分子克隆以及魚類存在兩種生長激素受體的證明.pdf

1、用RT-PCR加RACE的方法從南方大口鲇中克隆出其生長激素受體(GHR).當利用南方鲇GHR的核苷酸、氨基酸序列Blast東方純的基因組時,發(fā)現有兩個contig與其氨基酸序列非常相似,因此意識到魚類可能存在兩種不同基因編碼的GHR.隨后主要利用已經克隆得到的cohoGHR isfl、cohoGHR isf2、chGHR以及其他魚類GHR核苷酸和氨基酸序列Blast東方純的基因組,采用序列拼接的方法從東方純基因組中分離出兩種不同基因編

2、碼的fGHR1和fGHR2(該研究把和傳統(tǒng)GHR相似的叫做GHR1,把另外一種叫做GHR2).同時,我們用相似的方法從斑馬魚的EST序列和其高通量(HTG)基因組序列分離出斑馬魚zfGHR1和zfGHR2.在得到以上GHR序列后,又分析了人、鼠、雞等其他動物的基因組,發(fā)現GHR2只存在于魚類,是魚類特有的現象.該研究對GHR1和GHR2做了詳細的比較分析.分析比較fGHR1、fGHR2、zfGHR1和zfGHR2的特點發(fā)現,他們除了都具

3、有傳統(tǒng)GHR的特點外,GHR1和GHR2又各自區(qū)別開來:具體包括1)GHR的標志性特征Y/FGEFS:fGHR1、fGHR2和zfGHR1胞外鉸鏈區(qū)的結構域為FGEFS,在zfGHR2該結構域為FGDFS.但由于天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)由于性質非常相似,因此可以把他們理解為一致的;2)保守的胞外半胱氨酸殘基.在fGHR1和zfGHR1都為7個,數目和四足動物GHR一致;在fGHR2胞外胱氨酸殘基為5個,zfGHR2為4個,和同屬于G

4、HR2的cohoGHR isfl、cohoGHR isr2、chGHR基本保持一致,但是卻和傳統(tǒng)的GHR1有比較大的區(qū)別;3)該試驗克隆和分離得到GHR1和6HR2以及所有目前發(fā)表的GHR都有比較保守的Box1結構域,氨基酸組成為PPXPXP,研究表明最后兩個脯氨酸殘基作用最大;4)在所有GHR中都完全一致的Box2,序列為WVEFI;5)在GHR1和GHR2胞內部分都比較保守的酪氨酸殘基,他們被認為在信號傳導中起作用.以上比較分析表明

5、GHR2具有GHR最重要的結構,其就是GHR.但他們又有自己獨特的地方,因而和GHR1分開來,屬于GHR不同的一個類群.另外一點讓人感興趣的是:該研究在使用了各種方法后都沒有能夠分離出zfGHR1和zfGHR2的跨膜區(qū)和Box1.由于zfGHR1和zfGHR2分別位于不同的基因組contig上,理論上這種巧合發(fā)生的幾率是比較小的.更深入的研究將解釋這種現象發(fā)生的原因.最后,加上我們從尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus