有機(jī)酸及植物生長激素對(duì)兩種食用菌菌絲生長的影響機(jī)制初探.pdf

1、對(duì)食用菌生長條件的研究目前多集中在影響食用菌生長發(fā)育的營養(yǎng)條件和環(huán)境條件方面。一方面是各種培養(yǎng)基質(zhì)的適用性和不同原材料的配比、C/N比例、基質(zhì)pH、含水量等基本營養(yǎng)需求，另一方面是不同生長發(fā)育階段的溫度，光照，水分，氧氣等環(huán)境條件。對(duì)其它有一定影響的微量因子等的研究不是很多。有機(jī)酸作為菌絲生長過程中的代謝產(chǎn)物會(huì)不斷的積累在培養(yǎng)料中，使料內(nèi)的酸度逐漸提高，過高的酸度直接影響菌絲細(xì)胞的新陳代謝和整個(gè)生命活動(dòng)，還會(huì)增加雜菌污染的機(jī)會(huì)，所以了解

2、有機(jī)酸的代謝機(jī)制，有利于調(diào)控培養(yǎng)條件使之更適合菌絲的生長。
　　本研究利用外源添加一定量的有機(jī)酸和生長激素研究對(duì)菌絲生長的影響，從生物量、菌絲 DNA含量和菌絲生長速度三個(gè)宏觀表現(xiàn)判斷其對(duì)菌絲生長的作用程度。從而篩選出最利于菌絲生長的物質(zhì)添加濃度范圍并以有機(jī)酸為例進(jìn)行影響機(jī)制的探究，通過構(gòu)建液相色譜分析方法監(jiān)測食用菌菌絲生長過程中培養(yǎng)液中的有機(jī)酸的種類和含量隨著培養(yǎng)時(shí)間的變化，并且監(jiān)測菌絲培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液中葡萄糖的含量隨著培養(yǎng)時(shí)間

3、的變化，從而對(duì)比判斷添加的有機(jī)酸影響菌絲生物量、菌絲 DNA含量和菌絲生長速度的表現(xiàn)原因僅僅是因?yàn)樘峁┝艘粋€(gè)酸性環(huán)境還是作為一種碳源被菌絲利用了，若有機(jī)酸參與了菌絲的代謝，其在菌絲培養(yǎng)過程中被利用完了還是利用一部分等等問題就可以得到解答?？紤]到實(shí)驗(yàn)所用的標(biāo)準(zhǔn)PDB培養(yǎng)基本身含有多種有機(jī)酸，其中檸檬酸含量最多，本實(shí)驗(yàn)又采用成分清楚，含量精確的察氏培養(yǎng)基用相同的方法培養(yǎng)菌絲，然后分析有機(jī)酸的種類和含量變化，從而對(duì)比得出添加一定量的有機(jī)酸對(duì)菌

4、絲生長促進(jìn)作用的影響機(jī)制。
　　1.外源添加植物激素對(duì)食用菌菌絲生長的影響
　　本研究以白色金針菇G1、黃色金針菇F29和杏鮑菇XH為研究對(duì)象，通過在標(biāo)準(zhǔn)PDB培養(yǎng)液中添加不同濃度的赤霉素、吲哚乙酸、2,4-D、萘乙酸和玉米素，采用液體搖瓶培養(yǎng)的方法研究不同濃度的赤霉素、吲哚乙酸、2,4-D、萘乙酸和玉米素對(duì)G1、F29和XH菌絲生長的影響。主要以生物量為指標(biāo)初步篩選出對(duì)菌絲生物量有正向促進(jìn)作用的植物激素及其濃度范圍，結(jié)果表

5、明在實(shí)驗(yàn)所添加的濃度范圍內(nèi)，一定濃度的赤霉素和2,4-D對(duì)菌絲生物量有明顯的正向促進(jìn)作用，吲哚乙酸和萘乙酸的刺激作用大，實(shí)驗(yàn)濃度條件下均抑制菌絲生長，玉米素對(duì)菌絲生物量的影響作用不明顯。
　　2.外源添加有機(jī)酸對(duì)食用菌菌絲生長的影響
　　本研究以白色金針菇G1、黃色金針菇F29和杏鮑菇XH為研究對(duì)象，通過在標(biāo)準(zhǔn)PDB培養(yǎng)液中添加不同濃度的草酸、檸檬酸和酒石酸，采用液體搖瓶培養(yǎng)研究不同濃度的草酸，檸檬酸，酒石酸對(duì)G1、F29和

6、XH菌絲生長的影響。主要以生物量為指標(biāo)初步篩選出對(duì)菌絲生物量有正向促進(jìn)作用的有機(jī)酸濃度范圍，在實(shí)驗(yàn)所設(shè)置濃度梯度范圍內(nèi)得到初步結(jié)論，一定濃度的草酸、檸檬酸和酒石酸均對(duì)菌絲生長有正向促進(jìn)作用，G1和F29在0.005％的草酸濃度，0.02%檸檬酸濃度，0.01%酒石酸濃度下生物量積累最多，XH在0.01%的草酸濃度，0.04%檸檬酸濃度，0.02%酒石酸濃度下生物量積累最多。菌絲凍干研磨CTAB法測菌絲DNA含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)添加有機(jī)酸

7、濃度范圍內(nèi)高濃度抑制菌絲生長或促進(jìn)菌絲生長作用減弱，此時(shí)菌絲 DNA含量最高。采用在添加定量有機(jī)酸的棉籽殼固體培養(yǎng)料上測定菌絲生長速度，結(jié)果顯示隨著酸濃度的提高，特別是在酸濃度比較高時(shí)對(duì)菌絲生長有明顯的抑制作用，而低濃度的酸對(duì)菌絲生長有促進(jìn)作用，0.02%的草酸、0.08%的檸檬酸和0.04%的酒石酸對(duì)G1和F29菌絲生長速度有最大促進(jìn)作用，0.04%草酸、0.12%檸檬酸和0.08%酒石酸濃度下對(duì)XH菌絲生長有最大促進(jìn)作用。
　

8、　3.高效液相色譜分析有機(jī)酸的方法構(gòu)建
　　本研究利用Shodex公司的離子排阻色譜柱SH1011柱和KC-811柱串聯(lián)對(duì)食用菌PDB培養(yǎng)液中的有機(jī)酸定性定量，探究菌絲生長過程中培養(yǎng)液中有機(jī)酸的種類和含量隨著培養(yǎng)時(shí)間的變化，以期得到有機(jī)酸對(duì)食用菌菌絲生長的影響機(jī)制。以高氯酸溶液為流動(dòng)相，用紫外可見檢測器檢測，對(duì)流動(dòng)相濃度、吸收波長、溫度、流速等條件進(jìn)行優(yōu)化。確定的色譜條件為：以4mmol/L的高氯酸溶液（pH2.5）為流動(dòng)相，流速

9、為1.0mL/min，柱溫度為60℃，檢測波長為210nm。
　　4. PDB培養(yǎng)液中有機(jī)酸定性定量的分析
　　本研究通過添加一定量的草酸，檸檬酸和酒石酸培養(yǎng)菌絲，以不添加有機(jī)酸的PDB培養(yǎng)液培養(yǎng)菌絲為對(duì)照，利用構(gòu)建的液相色譜方法檢測食用菌PDB培養(yǎng)液中有機(jī)酸種類和含量隨著培養(yǎng)時(shí)間的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不接種未培養(yǎng)菌絲的PDB培養(yǎng)液中含有檸檬酸，酒石酸，己二酸和丁酸，不含草酸、甲酸、莽草酸、延胡索酸、丙酸、異丁酸和馬來酸；三種菌絲

10、培養(yǎng)前后有機(jī)酸的種類差別不大，但培養(yǎng)前后有機(jī)酸的含量差別很大。不同菌種對(duì)同種有機(jī)酸的代謝情況不同，不同的有機(jī)酸對(duì)同種菌種的影響不同，一種有機(jī)酸的添加也會(huì)影響其他有機(jī)酸的變化。有機(jī)酸對(duì)菌絲生長的影響不僅僅是因?yàn)樘峁┑乃嵝原h(huán)境，而是在培養(yǎng)過程中會(huì)被菌絲利用。三種有機(jī)酸的添加促進(jìn)菌絲對(duì)葡萄糖的利用。
　　5.察氏培養(yǎng)液中有機(jī)酸定性定量的分析
　　本研究考慮到 PDB培養(yǎng)基中本有的有機(jī)酸可能對(duì)生長過程中產(chǎn)生的有機(jī)酸定量有一定影響，為