香青蘭總黃酮抗支氣管哮喘的藥效學(xué)及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究香青蘭總黃酮治療支氣管哮喘的藥效學(xué)及作用機(jī)理。
　　方法:通過磷酸組胺和氯化乙酰膽堿引喘實驗,觀察豚鼠引喘潛伏期(從噴霧開始到哮喘發(fā)作、呼吸困難、直至抽搐跌倒的時間),研究香青蘭總黃酮的平喘作用。應(yīng)用卵蛋白(Ovialbumin,OVA)致敏并激發(fā)建立大鼠哮喘模型,并以地塞米松(1mg/kg)、香青蘭總黃酮低(80mg/kg)、中(160mg/kg)、高劑量(320mg/kg)給予灌胃,每天一次,連續(xù)30天,空白對照組給

2、予生理鹽水。末次給藥后1h,通過美國Buxco公司的整體體積描記系統(tǒng)檢測各組大鼠的肺功能及增強(qiáng)的呼吸間歇;HE染色觀察肺組織病理改變;ELISA試劑盒檢測大鼠血清中免疫球蛋白E(IgE)及支氣管肺泡灌流液(BALF)中白細(xì)胞介素-4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)和嗜酸性粒細(xì)胞活化趨化因子(Eotaxin-1)含量;免疫印跡法(Westernblot)檢測肺組織中GATA-3蛋白的表達(dá)水平;ELISA法檢測各組哮喘大鼠的肺組織中Ⅲ

3、型膠原和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的含量。研究香青蘭總黃酮治療支氣管哮喘的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:1.香青蘭總黃酮中、高劑量組和陽性藥氨茶堿組豚鼠的引喘潛伏期明顯比空白對照組有所延長。
　　2.哮喘模型大鼠出現(xiàn)明顯的呼吸困難、流涕、抓撓等癥狀。肺組織做病理學(xué)檢查表明,香青蘭總黃酮中劑量和高劑量組在肺、支氣管及血管周圍淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤的程度、范圍上較模型組有所減輕。
　　3.肺功能實驗中模型組呼吸

4、頻率(F)相對于正常組顯著增高(P<0.01),每分種通氣量(MVb)、吸氣流量峰值(PIFb)、呼氣流量峰值(PEFb)顯著減小(P<0.05或0.01),吸氣時間(Ti)、呼氣時間(Te)沒有顯著性差異(P>0.05);與模型組比較,香青蘭總黃酮中、高劑量組及地塞米松組可降低哮喘大鼠F(P<0.05或P<0.01),升高M(jìn)VB、PIFB和PEFB(P<0.05),但對Ti、Te沒有顯著影響(P>0.05)。
　　4.氣道高反應(yīng)

5、性實驗:與正常對照組比較:模型組增強(qiáng)的呼吸間歇(Penh)明顯升高(P<0.01);與模型組比較,香青蘭總黃酮中、高劑量組可顯著降低大鼠Penh(P<0.05或P<0.01);香青蘭總黃酮中、高劑量組Penh與地塞米松組比較差異沒有顯著性意義(P>0.05)。
　　5.免疫球蛋白E(IgE)含量測定:與正常對照組比較:模型組血清IgE含量明顯升高(P<0.01);與模型組比較,香青蘭總黃酮可劑量依賴性地降低大鼠血清IgE水平(P<

6、0.01);香青蘭總黃酮高劑量組血清IgE含量與地塞米松組比較差異沒有顯著性意義(P>0.05)。
　　6.白細(xì)胞介素-4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)濃度的測定:與正常對照組比較,模型組支氣管肺泡灌流液(BALF)中IL-4濃度升高,IFN-γ濃度降低,IL-4/IFN-γ比值增大(P<0.01),與模型組比較,香青蘭總黃酮可劑量依賴性地降低大鼠BALF中IL-4水平,升高IFN-γ水平,減小IL-4/IFN-γ比值(P

7、<0.05或P<0.01);香青蘭總黃酮高劑量組IL-4、IFN-γ濃度,IL-4/IFN-γ比值與地塞米松組比較差異沒有顯著性意義(P>0.05)。
　　7.嗜酸性粒細(xì)胞活化趨化因子(Eotaxin-1)含量測定:與正常對照組比較,模型組BALF中Eotaxin-1含量明顯升高(P<0.01);與模型組比較,香青蘭總黃酮可劑量依賴性地降低大鼠BALF中Eotaxin-1水平(P<0.05或P<0.01);香青蘭總黃酮高劑量組Eo

8、taxin-1含量與地塞米松組比較差異沒有顯著性意義(P>0.05)。
　　8.Ⅲ型膠原(ColⅢ)含量的測定:與正常對照組比較,模型組肺組織中ColⅢ含量明顯升高(P<0.01);與模型組比較,香青蘭總黃酮中、高劑量組及地塞米松組可降低肺組織中ColⅢ含量(P<0.05或P<0.01);香青蘭總黃酮中劑量組ColⅢ含量與地塞米松組比較差異沒有顯著性意義(P>0.05)。
　　9.轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)含量的測定

9、:與正常對照組比較,模型組肺組織中TGF-β1含量明顯升高(P<0.01);與模型組比較,香青蘭總黃酮中、高劑量組及地塞米松組可降低肺組織中TGF-β1含量(P<0.05或P<0.01);香青蘭總黃酮中劑量組TGF-β1含量與地塞米松組比較差異沒有顯著性意義(P>0.05)。
　　10.免疫印跡(Westernblot)法檢測肺組織GATA-3蛋白的表達(dá):與正常對照組比較,模型組肺組織GATA-3表達(dá)顯著增高(P<0.01,n=6

10、);與模型組比較,香青蘭總黃酮中、高劑量組及地塞米松組可顯著降低肺組織GATA-3表達(dá)(P<0.01,n=6);香青蘭總黃酮中、高劑量組肺組織GATA-3表達(dá)與地塞米松組比較差異沒有顯著性意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:香青蘭總黃酮具有明顯的平喘作用;香青蘭總黃酮通過改善哮喘大鼠肺功能,降低Penh,從而改善哮喘大鼠氣道高反應(yīng)性;抑制IgE的產(chǎn)生,從而抑制IgE所致的過敏性哮喘I型變態(tài)反應(yīng)。抑制炎性細(xì)胞浸潤及降低哮喘大鼠Eota