條件免疫反應(yīng)對(duì)小鼠支氣管哮喘的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的： (1)探討條件免疫反應(yīng)(CIR)對(duì)小鼠支氣管哮喘的作用機(jī)制(2)探討條件免疫反應(yīng)(CIR)對(duì)小鼠支氣管哮喘的療效方法選4-6周齡的雌性BALB/C小鼠，用卵清蛋白(OVA)腹膜下注射致敏，OVA霧化吸入激發(fā)，建立支氣管哮喘模型，健康對(duì)照組用PBS進(jìn)行相同操作。將模型小鼠隨機(jī)分為7組，每組15只：A組：CIR1組，以聲音(85分貝)為條件刺激，普米克令舒加萬(wàn)托林霧化吸入為非條件刺激，兩者結(jié)合7次(7天)后可建立條件免疫反應(yīng)

2、，此后每日再現(xiàn)條件刺激，每周條件刺激再與非條件刺激結(jié)合一次，共20周；B組：CIR2組，以糖精水為條件刺激，其余操作同CIR1組；C組：常規(guī)治療組，給予普米克令舒和萬(wàn)托林霧化吸入治療，1次/日，共20周：D組：常規(guī)治療減量組，給予普米克令舒和萬(wàn)托林霧化吸入，1次/日，共7天，之后1次/周，共20周；E組：?jiǎn)渭兟曇舸碳そM，單純給聲音刺激20周；F組：?jiǎn)渭兲蔷碳そM，單純給糖精水刺激20周；G組：空白對(duì)照組，PBS霧化吸入20周。以上7組

3、每天給予哮喘激發(fā)一次，其中各治療組(A、B、C、D)在治療間隔1小時(shí)以后給予激發(fā)。健康對(duì)照組為H組，用PBS激發(fā)20周。治療20周后，分離小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞，加入CD4+磁珠，利用分選器、分離柱分選出CD4+T淋巴細(xì)胞，經(jīng)PMA、離子霉素和莫能霉素刺激培養(yǎng)6小時(shí)后，用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞胞膜上煙堿型乙酰膽堿受體alpha7(nAChRa7)與胞漿內(nèi)IL-4、IFN-γ及IL-17表達(dá)量，分析nAChRα7與IL-4、IFN-γ

4、及IL-17的相關(guān)性。 結(jié)果： (1)治療20周后，哮喘組(E、F、G組)及減量治療組(D組)比健康對(duì)照組(H組)及各治療組(A、B、C組)體重明顯降低，癥狀加重(P＜0.01)。 (2)治療組(A、B、C組)比空白對(duì)照組(G組)肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞占白細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)明顯減少。A、B、C組分別是：8.67±1.23％，9.13±0.99％，8.40±1.12％，G組是16.2±1.32％，t1=16.13，t2

5、=16.58，t3=17.44，P＜0.01； (3)治療組(A、B、C組)與空白對(duì)照(G組)組相比較，CD4+T細(xì)胞表面nAChRα7表達(dá)降低。A、B、C組分別是：12.30±0.96％，12.6±1.14％，14.72±0.94％，G組是15.35±1.67％，t1=7.81，t2=6.51，t3=7.62，P＜0.01； (4)治療組(A、B、C組)與空白對(duì)照(G組)組相比較，IL-4表達(dá)降低。A、B、C組分別是：

6、5.25±0.97％，4.73 ±0.80％，5.31±1.18％，G組是12.26±1.31％，t1=16.68，t2=19.03，t3=15.30，P＜0.01： (5)治療組(A、B、C組)與空白對(duì)照(G組)組相比較，IL-17表達(dá)顯著降低。A、B、C組分別是：8.66±0.94％，8.49±0.69％，8.17±0.67％，G組是18.61±1.18％，t1=25.62，t2=23.59，t3=24.17，P＜0.01：

7、 (6)治療組(A、B、C組)與空白對(duì)照(G組)組相比較，IFN-γ表達(dá)顯著增高。A、B、C組分別是：18.04±1.05％，18.56±0.82％，18.13 ±0.96％，G組是3.65±0.70％，t1=44.25，t2=53.67，t3=47.34，P＜0.01： (7)nAChRtx7、IL-4、IL-17及IFN-γ細(xì)胞因子在A組與B組之間的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。nAChRα7:12.30±0.96％/12.6±

8、1.14％，t=1.04，P＞0.05；IL-4：5.25 ±0.97％/4，73±0.80％，t=1.09，P＞0.05； IL-17:8.66 ±0.94％/8.49±0.69％，t=1.38；P＞0.05：IFN-γ：18.04±1.05％/18.56±0.82％，t=0.11，P＞0.05； (8)在CIR及各哮喘組之間，nAChRα7與IL-4表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.76，P＜0.01)，與IL-17成正相關(guān)(r=0.4

9、6，P＜0.01)，與IFN-γ表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.69，P＜0.01)。 (9)肺組織病理改變的比較：各哮喘組(E、F、G組)及減量治療組(D)與健康對(duì)照組(H組)相比，氣道上皮增厚，管腔狹窄，管壁周?chē)写罅垦装Y細(xì)胞浸潤(rùn)，膠原纖維增多；各治療組(A、B、C組)經(jīng)治療后氣道上皮及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況明顯改善。 結(jié)論： 以聲音或糖精水為條件刺激，以普米克令舒加萬(wàn)托林霧化吸入為非條件刺激建立起的條件免疫反應(yīng)，可以通過(guò)下