內(nèi)源性NO對(duì)裸鼠肝癌模型中HDAC4表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察內(nèi)源性一氧化氮(NO)對(duì)裸鼠肝癌模型中組蛋白去乙?；?(HDAC4)表達(dá)的影響,從而探討新的抗腫瘤思路。
　　 方法:切片組織來(lái)源于已經(jīng)建立好的裸鼠肝癌模型:4-5周齡雄性BALB/c裸鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(腹腔注射0.2 ml生理鹽水)、5-氟尿嘧啶(5-FU,腹腔注射20 mg·kg-15-FU)、5-氟尿嘧啶+L-精氨酸組(5-FU+L-Arg,腹腔注射20 mg·kg-15-FU+100mg·kg-1L-Arg)

2、。隔日給藥1次,共3次。實(shí)驗(yàn)結(jié)束以后處死動(dòng)物,移植瘤組織部分進(jìn)行福爾馬林固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,切片。光鏡下病理學(xué)觀察裸鼠移植瘤壞死的程度和范圍,免疫組化SP法檢測(cè)裸鼠肝癌模型對(duì)照組、5-FU組,5-FU+L-Arg組誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)與HDAC4的表達(dá)。按照切片內(nèi)腫瘤組織壞死面積占腫瘤組織面積的百分比分為四個(gè)等級(jí):425％(+),25％-50％(++),50％-75％(+++),＞75％(++++)。參照Mattern方

3、法判定iNOS與HDAC4的表達(dá)結(jié)果,未見(jiàn)染色為0分,輕度染色(淺黃色)為1分,中度染色(棕黃色)為2分,深度染色(棕褐色)為3分;陽(yáng)性細(xì)胞百分比:未見(jiàn)染色為0分,染色細(xì)胞＜25％,為1分,25％-50％為2分,＞50％為3分。兩項(xiàng)得分相加0分判為陰性,1-2分為弱陽(yáng)(+),5-6分為強(qiáng)陽(yáng)(+++),3-4分介于二者之間(++)。
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)腫瘤壞死程度,iNOS與HDAC4在對(duì)照組、5-FU組,5-F

4、U+L-Arg組的表達(dá)結(jié)果進(jìn)行等級(jí)資料的秩和檢驗(yàn),同時(shí)對(duì)iNOS與HDAC4在各組之間表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行Spearman相關(guān)檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果:
　　 1.裸鼠移植瘤的病理學(xué)變化:鏡下觀察裸鼠移植瘤組織間有較多粗細(xì)不等的纖維組織將瘤細(xì)胞分隔成巢狀,部分呈腺腔狀排列,可見(jiàn)較多血竇結(jié)構(gòu)。大多數(shù)癌細(xì)胞成三角形,胞漿豐富,胞核大小形態(tài)極不規(guī)則,核漿比例增大,可見(jiàn)較多病理性核分裂象。藥物處理后腫瘤組織出現(xiàn)不同程度的壞死,對(duì)照組5例(

5、+),4例(++),1例(+++);5-FU組4例(++),4例(+++),2例(++++);5-FU+L-Arg組2例(++),3例(+++),5例(++++),5-FU組、5-FU+L-Arg組與對(duì)照組相比均具有顯著性差異。
　　 2.免疫組化SP法檢測(cè)iNOS和HDAC4蛋白的表達(dá)結(jié)果:iNOS以粗或者細(xì)的顆粒表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞漿,部分表達(dá)于胞膜。iNOS在對(duì)照組、5-FU組、5-FU+L-Arg組中的表達(dá)呈平行遞增關(guān)系,每

6、兩組間比較有顯著性差異。HDAC4彌漫表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞漿和或胞核,間質(zhì)細(xì)胞亦可見(jiàn)表達(dá)。HDAC4則在對(duì)照組、5-FU組、5-FU+L-Arg組中的表達(dá)成遞減趨勢(shì),且每?jī)山M間比較有顯著性差異。
　　 3.iNOS和HDAC4蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析結(jié)果:經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析表明,iNOS與HDAC4在對(duì)照組中無(wú)相關(guān)性,而在5-FU組、5-FU+L-Arg組中的表達(dá)成負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 ①裸鼠移植瘤組