HBx對(duì)肝癌細(xì)胞內(nèi)源性Survivin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：Survivin(存活素)是細(xì)胞凋亡抑制蛋白家族(IAP)中的一個(gè)成員，X基因是HBV基因組里最小的開放讀碼框(ORF)，它與HCC的發(fā)生發(fā)展關(guān)系最密切。探討X基因?qū)?nèi)源性survivin表達(dá)的影響以及分析比較survivin在肝炎、肝硬化以及腫瘤組織中的表達(dá)，進(jìn)一步探討survivin在HBV感染的慢性乙型肝炎患者發(fā)展成HCC的可能分子機(jī)制奠定理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 研究方法:用脂質(zhì)體LipofectmineTM2000分別將

2、pcDNA3.1-HBx(表達(dá)X基因)和空質(zhì)粒pcDNA3.1導(dǎo)入HepG2細(xì)胞，另設(shè)一組未轉(zhuǎn)染任何質(zhì)粒為空白對(duì)照。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后分別予G418進(jìn)行篩選建立穩(wěn)定細(xì)胞株，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：(1)應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)HBx的表達(dá)。(2)應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)定性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中survivin的表達(dá)。(3)提取各組細(xì)胞總蛋白，通過蛋白免疫印跡(Western Bloting)方法比較各組survivin的表達(dá)量，進(jìn)一步印證細(xì)胞免疫技術(shù)的結(jié)

3、果。(4)收集本院經(jīng)病理證實(shí)的20例原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌組織標(biāo)本(其中低分化9例，中分化7例，高分化4例)以及30例肝炎組織標(biāo)本(含早期肝硬化組織標(biāo)本10例，病理分級(jí)：G2/S2～G4/S4)，通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)survivin的表達(dá)。 結(jié)論:成功地將含X基因表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-HBx轉(zhuǎn)染至HepG2細(xì)胞中，并建立了穩(wěn)定細(xì)胞株；X基因可以促進(jìn)內(nèi)源性survivin蛋白的表達(dá)，這可能是HBV感染的慢性乙型肝炎患者發(fā)展至HC