HDAC2和HDAC4參與TSA對(duì)神經(jīng)病理性疼痛鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:本課題擬采用坐骨神經(jīng)結(jié)扎(CCI)法構(gòu)建神經(jīng)病理性疼痛模型，鞘內(nèi)注射組蛋白去乙?；?HDAC)抑制劑曲古菌素A(TSA)，通過觀察大鼠疼痛行為學(xué)的改變，驗(yàn)證TSA對(duì)神經(jīng)病理性疼痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用。并選擇性觀察HDAC亞型HDAC2和HDAC4蛋白酶在CCI大鼠腰段脊髓的動(dòng)態(tài)變化，探討可能參與神經(jīng)病理性疼痛表觀遺傳調(diào)控的HDAC亞型。然后通過觀察TSA對(duì)HDAC2和HDAC4及疼痛相關(guān)分子GAD65表達(dá)的影響，初步探討HDAC亞型參

2、與神經(jīng)病理性疼痛潛在的表觀遺傳調(diào)控通路，為神經(jīng)病理性疼痛的治療研究提供一條新思路。
　　方法:
　　1.健康成年雄性SD大鼠，體重220～250g，隨機(jī)分為4組:Sham+DMSO組、CCI+DMSO組、CCI+TSA10μg組和CCI+TSA2μg組。CCI組建立左側(cè)CCI模型，sham組僅暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)而不結(jié)扎，各組大鼠術(shù)后第7天疼痛行為學(xué)測(cè)定后分別鞘內(nèi)注射溶劑5％DMSO、TSA10μg和2μg(溶于5％DMSO)。

3、術(shù)前1天及術(shù)后3、7、10、14、21天分別測(cè)定足底機(jī)械痛閾和熱痛閾，觀察鞘內(nèi)注射TSA對(duì)疼痛行為學(xué)的改變。
　　2.取健康成年雄性SD大鼠，體重220～250g，隨機(jī)分為Sham組和CCI組，Sham組僅暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)而不結(jié)扎，CCI組建立左側(cè)CCI模型。分別于術(shù)前1天及術(shù)后3、7、14、21天測(cè)定足底機(jī)械痛閾和熱痛閾，并取大鼠術(shù)后3、7、14、21天腰段脊髓（約L4-L6節(jié)段）。采用免疫熒光、Western-blot技術(shù)測(cè)定

4、HDAC2和HDAC4蛋白的動(dòng)態(tài)變化。
　　3.取1中sham+DMSO組(sham組)、CCI+DMSO組(CCI組)和CCI+TSA10μg組（TSA組）三組大鼠術(shù)后第10天的腰段脊髓組織。Western-blot法檢測(cè)大鼠腰段脊髓HDAC2、HDAC4蛋白和GAD65蛋白的表達(dá)水平，QPCR法檢測(cè)大鼠腰段脊髓HDAC2和HDAC4mRNA的水平。
　　結(jié)果:
　　1.CCI術(shù)后大鼠左后肢機(jī)械痛閾和熱痛閾值于第7天

5、開始明顯降低，第14天達(dá)到最低值，與基礎(chǔ)值及sham組大鼠痛閾均有明顯差異(P＜0.05);鞘內(nèi)注射TSA大劑量（10μg組）可同時(shí)緩解CCI大鼠的機(jī)械痛敏和熱痛敏，且鎮(zhèn)痛作用在術(shù)后10天時(shí)（給藥完成1天后）最明顯，可持續(xù)至14天;而小劑量（2μg組）只在術(shù)后10天時(shí)減輕了大鼠的機(jī)械痛，未緩解大鼠的熱痛敏。
　　2.HDAC2和HDAC4陽性細(xì)胞廣泛分布于大鼠腰段脊髓組織，脊髓灰質(zhì)的陽性表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于白質(zhì)，且脊髓背角表達(dá)致密。HDA

6、C2蛋白主要位于神經(jīng)元細(xì)胞核內(nèi)，在星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞中幾乎不表達(dá);而HDAC4主要位于神經(jīng)元胞質(zhì)。CCI大鼠腰段脊髓HDAC2和HDAC4蛋白水平較sham組明顯增高(P＜0.05)，且蛋白水平隨疼痛行為的發(fā)展而動(dòng)態(tài)變化。
　　3.CCI組與sham組相比，HDAC2和HDAC4蛋白表達(dá)量及mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯增高(P＜0.05)。TSA組與CCI組相比，HDAC2和HDAC4蛋白量降低(P＜0.05)，HDAC2和HDA

7、C4 mRNA相對(duì)表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。CCI組大鼠腰段脊髓GAD65蛋白表達(dá)量較sham組明顯降低(P＜0.05)，而TSA組GAD65蛋白量較CCI組增高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.鞘內(nèi)注射曲古菌素A(TSA)可緩解坐骨神經(jīng)慢性縮窄性損傷(CCI)導(dǎo)致的神經(jīng)病理性疼痛大鼠的機(jī)械痛敏和熱痛敏。
　　2.CCI所致的神經(jīng)病理性疼痛大鼠腰段脊髓中，HDAC2和HDAC4均有大量表達(dá)，且主要表