健脾解毒復(fù)方中藥對裸鼠肝癌模型的抗癌作用及機制.pdf

1、研究背景： 原發(fā)性肝癌(primary hepatic cancer，PHC)80％-90％是肝細胞癌，是世界上第五大常見惡性腫瘤，第三大惡性腫瘤死亡原因，具有預(yù)后差、死亡率高的特點，然而目前的肝癌的治療方法的作用不甚理想。 肝癌多屬于中醫(yī)學(xué)“積聚”、“癥瘕”、“黃疸”、“臌脹”、“脅痛”等范疇。本病的發(fā)生是由于正氣不足，臟腑功能失調(diào)，氣滯、血瘀、痰凝、毒聚而形成的。肝癌的病因病機總的來說是本虛標(biāo)實，以脾虛為本，氣滯、血

2、瘀、濕熱、毒邪為標(biāo)。 健脾解毒復(fù)方中藥是導(dǎo)師陳澤雄副教授使用多年、針對肝癌患者的經(jīng)驗方劑，具有益氣健脾、解毒散結(jié)、疏肝和血之功。既往導(dǎo)師陳澤雄和師兄胡洪濤研究表明，該方對體外肝癌細胞株端粒酶及細胞增殖有抑制作用。臨床研究也說明本方明顯改善17ACE術(shù)肝癌患者的癥狀，提高生活質(zhì)量。師兄孫保國采用本方干預(yù)荷瘤裸鼠，發(fā)現(xiàn)中藥組總存活率高于化療組，肝內(nèi)轉(zhuǎn)移少于化療組，并可明顯增加PTEN蛋白的表達強度，尤其是癌旁組織，中藥組組間比較提示

3、中濃度組效果最好，提示中藥組抗癌作用與抑癌基因PTEN的高表達有關(guān)。但中藥組濃度之間跨度較大，干預(yù)時間較短，中藥如何調(diào)控抑癌基因PTEN的表達尚不明確，尤其癌旁組織PTEN的高表達現(xiàn)象目前文獻無類似報道。 研究目的： 進一步研究健脾解毒復(fù)方中藥對間接原位移植雄性裸鼠肝癌模型的抗癌作用及部分相關(guān)機制。 1探討肝癌中PTEN和ERK1與肝癌臨床進展的關(guān)系及兩者的相關(guān)性。 2分析不同濃度的健脾解毒中藥對肝癌裸鼠

4、的抗癌作用及作用差異。 3分析不同濃度的健脾解毒中藥對肝癌組織、癌旁組織、正常組織PTEN和ERK1的調(diào)控作用。 材料： 1 造模材料人肝細胞癌細胞株Bel-7402；BALB/c裸鼠，雄性，4～6周齡，100只。 2 干預(yù)材料健脾解毒復(fù)方中藥；FT207片(替加氟片)。 3 試劑兔抗人PTEN單克隆抗體、兔抗人ERK1單克隆抗體、二步法免疫組化檢測試劑。 實驗方法： 采用人肝細胞

5、癌細胞株Bel-7402間接原位移植，造雄性肝癌裸鼠模型90只，造模后24小時隨機分9組，即復(fù)方中藥A、B、C、D、E、F、G組，F(xiàn)T207化療組(FT)，生理鹽水組(NS)，8周后處死裸鼠，觀察各組荷瘤裸鼠的生存時間、瘤體積、瘤指數(shù)、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移情況等，并用二步法免疫組織化學(xué)檢測肝組織、肝癌旁組織、肝癌組織中PTEN和ERK1蛋白的表達。另外10只雄性裸鼠不造模作為正常對照組(DZ)。 結(jié)果： 1、解剖證實造模成功率67/

6、88；實驗結(jié)束獲得有效病理標(biāo)本67例，成瘤以多發(fā)小結(jié)節(jié)為主。 2、生存情況分析：中藥組的生存時間和生存率均優(yōu)于化療組，p＜0.05，中藥組D和E組的生存時間長于生理鹽水組，p＜0.05。 3、體重變化分析：中藥組荷瘤裸鼠治療后體重有增加，p＜0.05，化療組治療后體重明顯下降，p＜0.05。 4、解剖情況分析：中藥組的肝指數(shù)和脾指數(shù)均大于化療組，p＜0.05。中藥組中C、E、F組脾指數(shù)比化療組大，p＜0.05,C

7、組脾臟比D組脾指數(shù)大，p＜0.05。 5、抑癌基因PTEN表達分析：荷瘤裸鼠肝臟PTEN蛋白表達強度正常肝組織最高，癌旁次之，肝組織最少。中藥組B、D、E組PTEN在正常肝組織的表達高于生理鹽水組、化療組、正常照組，p＜0.05。中藥組D組PTEN在癌旁組織的表達高于生理鹽水組，p＜0.05，中藥組在癌組織中PTEN的表達高于生理鹽水組和化療組，p＜0.05。 6、ERK1表達分析：荷瘤裸鼠肝臟ERK1蛋白表達強度癌組織

8、最高，癌旁次之，肝組織最少，癌旁組織ERK1表達強度化療組高于中藥組和牛理鹽水組，癌組織ERK1表達強度生理鹽水組和化療組的的ERKl的表達均高于中藥C、D、E、G、F組。 7、PTEN表達和ERK1表達相關(guān)性分析：在癌組織中，PTEN和ERK1的表達呈負相關(guān)，且具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1、健脾解毒復(fù)方中藥可以增加荷瘤裸鼠的體重，改善營養(yǎng)狀態(tài)，延長荷瘤裸鼠的生存時間。 2、荷瘤裸鼠肝臟抑癌基因PTEN蛋

9、白表達強度正常肝組織最高，癌旁次之，癌組織最少，健脾解毒復(fù)方中藥能夠上調(diào)荷瘤鼠正常肝組織和癌旁組織抑癌基因PTEN蛋白的表達。 3、荷瘤裸鼠肝臟ERK1蛋白表達強度癌組織最高，癌旁次之，肝組織最少，不同濃度健脾解毒復(fù)方中藥可以降低癌旁組織和癌組織ERK1表達。 4、在癌組織中，PTEN和ERK1的表達呈負相關(guān)。 5、健脾解毒復(fù)方中藥抗癌作用存在量效關(guān)系，以0.375g生藥/ml-0.625g生藥/ml濃度療效最佳