Survivin shRNA對白血病細(xì)胞調(diào)亡和耐藥性影響的研究.pdf

1、第一部份 Survivin基因在白血病細(xì)胞中的表達(dá)、意義及多種化療藥對其的影響的研究 目的觀察Survivin在白血病患者中的表達(dá)及與化療的關(guān)系；同時檢測其在多種白血病細(xì)胞系中的表達(dá)，并觀察多種化療藥對HL-60細(xì)胞中Survivin表達(dá)的影響。方法用RT-PCR方法檢測37例白血病患者和10例正常成人骨髓中Survivin基因的表達(dá)，并給與合適的方案化療，評判療效。另用RT-PCR方法檢測Survivin在三種白血病細(xì)

2、胞系中表達(dá)。用MTT法篩選出DNR、MIT和As2O3的合適濃度，將其作用于HL-60細(xì)胞，RT-PCR和WesternBlot檢測作用前后SurvivinmRNA和蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果37例白血病患者中有25例表達(dá)Survivin，陽性率為67.6％，其中急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)中SurvivinmRNA表達(dá)陽性率為73.3％，高于急性髓系白血病(AML，63.6％)，但均高于正常對照組的20.0％(P＜0.05)。在2

3、2例AML患者中，SurvivinmRNA表達(dá)陰性者接受2個療程化療后緩解率(CR)87.5％，明顯高于表達(dá)陽性患者的64.3％。在15例ALL患者中也有類似的結(jié)果，CR分別為100.0％和81.8％。三種細(xì)胞系K562、HL-60和U937全部表達(dá)Survivin。在給與化療藥的第一天，三組HL-60細(xì)胞中SurvivinmRNA表達(dá)水平全部降低：其中DNR組下降了10％，MIT組下降40％(P＜0.01)，As2O3組下降了25％(

4、P＜0.01)。在第三天，給與DNR和MIT組的HL-60細(xì)胞中SurvivinmRNA表達(dá)較第一天有明顯的升高，分別上升20％(P＜0.05)和65％(P＜0.01)；但給與As2O3組的SurvivinmRNA表達(dá)仍持續(xù)降低，僅為第一天的68％(P＜0.01)。Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)給與DNR和MIT作用三天后的HL-60細(xì)胞中Survivin蛋白含量分別升高了14％和11％，而給與As2O3組則下降了82％。 結(jié)論

5、Survivin基因在白血病細(xì)胞中有較高的表達(dá)，并與療效及預(yù)后有密切的關(guān)系。給與化療藥后Survivin呈現(xiàn)先降低后升高的現(xiàn)象；而三氧化二砷因有著不同的作用機制，表現(xiàn)為Survivin持續(xù)降低。 第二部份 SurvivinshRNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建、轉(zhuǎn)染和篩選 目的構(gòu)建針對Survivin基因的短發(fā)夾環(huán)RNA(shRNA)的真核表達(dá)載體，并篩選出穩(wěn)定表達(dá)SurvivinshRNA的HL-60細(xì)胞。 結(jié)論

6、成功構(gòu)建了針對Survivin基因的shRNA真核表達(dá)載體，并獲得了穩(wěn)定表達(dá)SurvivinshRNA的細(xì)胞株HL-60/Survivin。 第三部分 SurvivinshRNA對HL-60細(xì)胞化療敏感性的影響 目的觀察SurvivinshRNA對HL-60細(xì)胞化療敏感性的影響。 結(jié)論pEGFP-Survivin表達(dá)的SurvivinshRNA能明顯降低HL-60細(xì)胞中Survivin的表達(dá)，提高對化療藥

7、物的敏感性。 第四部分 Survivin基因沉默對K562細(xì)胞調(diào)亡影響的研究 目的使設(shè)計合成的短發(fā)夾狀RNA真核表達(dá)載體在細(xì)胞內(nèi)高效轉(zhuǎn)錄，觀察shRNA對K562細(xì)胞內(nèi)Survivin的抑制作用，及其對細(xì)胞凋亡的影響，探討Survivin在白血病發(fā)病中的作用和RNA干擾技術(shù)在人類細(xì)胞株中的應(yīng)用。 結(jié)論而pEGFP-Survivin在K562細(xì)胞中的研究結(jié)果提示Survivin在白血病細(xì)胞的增生、進(jìn)展調(diào)控中

8、起重要作用，而通過高效的RNA干擾技術(shù)抑制其表達(dá)有可能為未來白血病的治療提供新的有效途徑。 第五部分 HL-60細(xì)胞Survivin基因表達(dá)與JAK2/STAT3途徑關(guān)系的初探 目的觀察Survivin基因和JAK2/STAT3途徑之間的關(guān)系并對HL-60細(xì)胞周期的影響，以探討Survivin在白血病中發(fā)揮作用的機制，尋找治療白血病的新途徑。 結(jié)論Survivin基因通過JAK2/STAT3途徑調(diào)節(jié)白血病