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1、目的:1.觀察低濃度哇巴因?qū)Σ煌籽≡?xì)胞及細(xì)胞株生長(zhǎng)的影響,探討哇巴因用于白血病臨床治療的可行性;2.觀察鈉鉀ATP酶基礎(chǔ)表達(dá)及哇巴因?qū)Π籽〖?xì)胞鈉鉀ATP酶表達(dá)的影響情況。
方法:原代白血病細(xì)胞及白血病細(xì)胞株培養(yǎng);采用MTT法檢測(cè)不同濃度(0.1、1、10nmol/L)哇巴因?qū)Π籽〖?xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)控作用;用流式細(xì)胞儀檢測(cè)低濃度(≤10nmol/L)哇巴因?qū)Π籽〖?xì)胞周期的影響;Western-blot檢測(cè)各白血病細(xì)胞
2、鈉鉀ATP酶α1亞單位在蛋白水平上的表達(dá)及低濃度(1、10nmol/L)哇巴因作用下的變化情況。
結(jié)果:MTT方法檢測(cè)顯示:低濃度哇巴因作用24小時(shí),巨核系白血病M07e、Meg-01細(xì)胞株增殖受抑;而淋巴系白血病 B95、Jhhan細(xì)胞株及原代白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)則出現(xiàn)增殖;作用均呈濃度依賴(lài)性。
用流式細(xì)胞儀做進(jìn)一步檢測(cè),結(jié)果表明低濃度哇巴因作用24h,使巨核系白血病M07e、Meg-01細(xì)胞株細(xì)胞周期阻滯于G
3、1期;使淋巴系白血病B95、Jhhan細(xì)胞株S期及G2/M期細(xì)胞比率增高。
Western-blot結(jié)果顯示:巨核系白血病M07e、Meg-01細(xì)胞株的鈉鉀ATP酶α1亞單位基礎(chǔ)表達(dá)顯著低于其他細(xì)胞(P<0.01);且經(jīng)低濃度哇巴因干預(yù)后,巨核系白血病細(xì)胞株鈉鉀ATP酶α1亞單位表達(dá)降低;而淋巴系白血病B95、Jhhan細(xì)胞株鈉鉀ATP酶α1亞單位的表達(dá)增高。
結(jié)論:哇巴因在低濃度(≤10nmol/L)下,對(duì)
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