iASPP對白血病細胞的增殖凋亡的作用及DJ-1基因在急性白血病中的表達及其對白血病細胞增殖凋亡的影響.pdf

1、研究目的： iASPP是p53凋亡促進蛋白(apoptosisstimulatingproteinofp53，ASPP)家族的抑制性成員(inhibitorymemberofASPPofp53family，iASPP)，是新發(fā)現(xiàn)的一個p53拮抗基因，它存在于從線蟲到人類等多種生物細胞內，高度保守。作為一個p53重要的癌癥抑制因子，iASPP參與多種腫瘤的發(fā)生。我們實驗室通過半定量RT-PCR方法檢測了iASPP在急性白血病(ac

2、uteleukemia，AL)細胞中的表達情況，發(fā)現(xiàn)AL患者iASPP表達顯著高于正常組及AL完全緩解組，這一結果提示iASPP基因過表達可能與AL的發(fā)生發(fā)展有關。本研究通過RNA干擾下調iASPP癌基因在白血病細胞系中的表達，探索iASPP在AL發(fā)生中的作用機制，以及p53在iASPP調節(jié)通路中的作用。 研究方法： 應用RNA干擾的方法抑制癌基因iASPP在p53野生型白血病細胞系Nalm6和p53突變型白血病細胞系K

3、562中的表達，RT-PCR測定iASPPmRNA水平，Westernblot檢測iASPP蛋白水平。觀察細胞形態(tài)和結構改變，流式細胞術分析細胞周期和分化抗原的表達，集落形成實驗分析細胞增殖能力的改變，AnnexinV標記，流式細胞術分析細胞凋亡。 研究結果： 1)iASPP特異性的小分子雙鏈RNA(siRNA)處理白血病細胞后，iASPPmRNA及蛋白水平均下調。 2)與對照組相比，iASPPsiRNA處理組的

4、細胞集落形成能力明顯下降，K562細胞集落數(shù)由908±20.95/孔降至663.3±10.6/孔，下降26.95％(P＜0.05)，Nalm6細胞的集落數(shù)變化更為明顯，由484.7±14.6/孔降至158±7/孔(P＜0.05)，下降了674％。 3)iASPP表達下調增強了p53野生型白血病細胞系Nalm6對化療藥物依托泊甙(VP16)和柔紅霉素(DNR)的敏感性。與iASPPsiRNA和VP16單獨處理組相比，聯(lián)合使用iAS

5、PPsiRNA和VP16時，凋亡細胞比例明顯升高，細胞早期凋亡率分別由(9.43±3.86)％和(34.11±9.9)％升高到(52.29±6.79)％(P＜0.01，P＜0.05)；同樣，與iASPPsiRNA和DNR單獨處理組相比，聯(lián)合使用iASPPsiRNA和DNR時，凋亡細胞比例也明顯升高，細胞早期凋亡率分別由(8.4±3.0)％和(23.7±2.7)％升高到(45.1±4.5)％(P＜0.01，P＜0.01)。而在p53突變型

6、白血病細胞系K562中，iASPPsiRNA不能顯著增強白血病細胞對VP16和DNR的敏感性(P＞0.05)，提示p53表達在iASPP介導的細胞凋亡中發(fā)揮作用。 4)RT-PCR結果顯示，化療藥物VP16和DNR作用于Nalm6和K562細胞后，并不影響iASPP在細胞中的表達(P＞0.05)。 5)Nalm6及K562細胞中凋亡相關基因c-Myc、bcl-2的mRNA表達水平隨著iASPP的下調而下調。c-Myc分別