PML(ΔNLS)和氯化鋰對白血病NB4細胞增殖與凋亡影響的研究.pdf

1、本文分析了PML(ΔNLS)和氯化鋰對白血病NB4細胞增殖與凋亡影響。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：重組慢病毒LV5-PML（ΔNLS）的構建及其對NB4細胞增殖與凋亡的影響。
　　目的：通過重組慢病毒介導的PML(ΔNLS)過表達，研究其對白血病NB4細胞增殖與凋亡的影響，并對其作用機制進行探討。
　　方法：以真核質粒pCMV-HA-PML(ΔNLS)為PCR反應模板，體外擴增PML（ΔNLS）基因，克隆入慢病

2、毒載體LV5-EF1a-GFP/puro,與包裝輔助質粒pHelper1.0、pHelper2.0在脂質體2000的作用下共轉染293T細胞，包裝病毒。利用重組慢病毒LV5-PML（ΔNLS）感染NB4細胞，RT-PCR法驗證PML（ΔNLS）mRNA的轉錄程度，Western blot檢測PML（ΔNLS）、Akt、p-Akt(ser473)、S6和 p-S6(ser235/236)蛋白表達的變化。CCK-8實驗觀察各組細胞增殖活力;

3、100 nmol/L雷帕霉素處理各組細胞，24h后流式細胞術分析細胞凋亡和周期的變化。
　　結果：成功構建攜帶PML（ΔNLS）的慢病毒，病毒感染NB4細胞，感染效率達82.74％，LV5-PML（ΔNLS）攜帶的PML（ΔNLS）能夠在NB4細胞中穩(wěn)定表達；感染 LV5-PML（ΔNLS）的 NB4細胞中p-Akt(ser473)和 p-S6(ser235/236)蛋白表達上升(P<0.05)，而 Akt和 S6蛋白表達無明顯變

4、化；CCK-8結果顯示，與未感染組和感染 LV5-NC組相比，感染LV5-PML(ΔNLS)組NB4細胞增殖活力明顯上升(P<0.05)；流式細胞術結果顯示，感染重組慢病毒PML(ΔNLS)組G1期細胞比例下降，進入S期細胞比例增多，且凋亡率明顯低于感染LV5-NC組和未感染組(P<0.05)。
　　結論：成功構建了重組慢病毒PML（ΔNLS），PML(ΔNLS)過表達可通過活化Akt信號通路促進NB4細胞體外增殖，降低其凋亡率,

5、并影響S6蛋白磷酸化。
　　第二部分：氯化鋰對NB4細胞增殖與凋亡的作用。
　　目的：利用氯化鋰處理NB4細胞，探討其對NB4細胞增殖與凋亡的影響。
　　方法：以0-40mmol/L濃度的氯化鋰作用于NB4細胞，培養(yǎng)24 h， CCK-8實驗觀察細胞增殖情況,Western blot檢測各種細胞Akt1蛋白表達水平。以20 mmol/L濃度的氯化鋰作用于NB4細胞，培養(yǎng)24 h, FCM法分析細胞凋亡與周期變化， We

6、stern blot檢測各組細胞β-catenin, p-GSK-3, GSK-3 and c-Myc蛋白表達水平。
　　結果：0-40 mmol/L氯化鋰抑制NB4細胞增殖，使Akt1蛋白表達下降。20 mmol/L氯化鋰作用于NB4細胞后，細胞凋亡率上升，細胞周期阻滯在G2/M期，c-Myc蛋白表達下降，p-GSK-3，β-catenin蛋白表達上調，GSK-3β蛋白表達無明顯變化。
　　結論：氯化鋰可通過抑制GSK-3