E3泛素連接酶Znrf1對(duì)急性白血病細(xì)胞NB4干性的影響.pdf

1、目的：E3泛素連接酶的突變和異常表達(dá)在惡性血液系統(tǒng)疾病中起重要作用，Znrf1基因是一種新發(fā)現(xiàn)的E3泛素連接酶，其在白血病中的作用研究甚少。本研究通過(guò)觀察沉默及過(guò)表達(dá)Znrf1對(duì)急性早幼粒細(xì)胞系NB4腫瘤干細(xì)胞干性，細(xì)胞增殖以及凋亡的影響，來(lái)研究Znrf1基因在白血病細(xì)胞系NB4中的作用，從而進(jìn)一步探討Znrf1在白血病發(fā)生及發(fā)展中的意義。
　　方法：本研究中，用電轉(zhuǎn)染的方法將Znrf1基因的siRNA以及其過(guò)表達(dá)質(zhì)粒NM-032

2、268瞬轉(zhuǎn)入NB4細(xì)胞，利用CFSE染色檢測(cè)轉(zhuǎn)染后不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞增殖，通過(guò)AnnexinV-FITC/PI的方法來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡，通過(guò)流式檢測(cè)細(xì)胞ALDH陽(yáng)性率來(lái)闡明白血病細(xì)胞干性的變化。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)Western Blot檢測(cè)AKT、P-AKT以及STAT-5表達(dá)水平的變化，探討Znrf1影響白血病細(xì)胞干性的可能機(jī)制。
　　結(jié)果：篩選出NB4細(xì)胞的最佳電轉(zhuǎn)條件后。CFSE法檢測(cè)細(xì)胞增殖，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：過(guò)表達(dá)Znrf1基因48

3、H、72H均能夠使其細(xì)胞增殖速度較對(duì)照組明顯減慢，而沉默Znrf1后，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞的增殖速度無(wú)明顯差別。流式檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明：過(guò)表達(dá)Znrf1基因后48H的凋亡率較對(duì)照組明顯增加，而沉默Znrf1基因后，其凋亡率與對(duì)照組相比在24H、48H均無(wú)明顯差異。流式檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明：過(guò)表達(dá)Znrf1基因后的NB4細(xì)胞中ALDH陽(yáng)性率較對(duì)照組降低，表明上調(diào)Znrf1能夠抑制其白血病細(xì)胞干性。Western Blot檢測(cè)上調(diào)Znrf1基因后AKT以及

4、STAT-5的動(dòng)態(tài)變化水平。發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Znrf1基因48H后，實(shí)驗(yàn)組的AKT、P-AKT及STAT-5的表達(dá)量較對(duì)照組低。而沉默Znrf1基因48H后，AKT的表達(dá)量較對(duì)照組無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論：（1）過(guò)表達(dá)Znrf1基因可以抑制白血病細(xì)胞干性，降低白血病干細(xì)胞池，抑制急性早幼粒白血病細(xì)胞NB4的增殖，使白血病細(xì)胞的凋亡率增加。
　　（2）Znrf1降低AKT、P-AKT及STAT-5表達(dá)，這可能是Znrf1影響NB4白血