低氧對白血病細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的生物學(xué)特性之一，腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移最終成為大多數(shù)癌癥患者死亡的主要原因。白血病是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，近年來由于聯(lián)合化療的不斷改進(jìn)其緩解率得到顯著提高，但是在臨床上，白血病發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移是其復(fù)發(fā)和治療失敗的主要原因，也是臨床醫(yī)生治療白血病最棘手的問題之一。目前的研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤內(nèi)廣泛存在缺氧，使腫瘤更具有侵襲性，容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia-inducible factor-1alpha，HIF-1

2、α）是受低氧直接調(diào)控的主要核轉(zhuǎn)錄因子之一，在腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。有研究表明，在實(shí)體瘤中HIF-1α可通過調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix Metallo proteinase，MMPs）等靶基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)血管的形成及細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而促使腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。抑制HIF-1α和/或VEGF、MMPs的產(chǎn)生就有可能

3、抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。然而，有關(guān)低氧對白血病細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移作用的研究尚未見報(bào)道。 目的：以人慢性髓系白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞和人B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株Raji細(xì)胞為研究對象，觀察低氧對白血病細(xì)胞粘附、運(yùn)動(dòng)及侵襲能力的影響，檢測低氧誘導(dǎo)因子-1α、血管內(nèi)皮生長因子及基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，初步探討低氧對白血病細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。 方法：體外常規(guī)培養(yǎng)，用不同濃度的氧（常氧（21％）、1％、3％、5％）處理K562細(xì)胞和Raji細(xì)

4、胞，通過細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)和腫瘤細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)，觀察不同濃度的氧對白血病細(xì)胞粘附能力、運(yùn)動(dòng)能力和侵襲能力的影響，并采用Western Blot檢測K562細(xì)胞和Raji細(xì)胞HIF-1α蛋白，RT-PCR檢測K562細(xì)胞和Raji細(xì)胞HIF-1α、VEGF、MMP-2和MMP-9mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1.常氧、1％、3％、5％處理24h，K562細(xì)胞粘附率分別為100％、（101.20±0.17）％、（191

5、.60±0.27）％、（160.00±0.24）％；Raji細(xì)胞粘附率分別為100％、（101.15±0.14）％、（179.08±0.17）％、（138.98±0.25）％。 2.常氧、1％、3％、5％處理24h，K562細(xì)胞遷移率分別為100％、（110.09±0.20）％、（214.71±0.30）％、（154.60±0.29）％；Raji細(xì)胞遷移率分別為100％、（99.81±0.10）％、（174.16±0.12）％、

6、（138.51±0.22）％。 3.常氧、1％、3％、5％處理24h，K562細(xì)胞侵襲率分別為100％、（100.65±0.09）％、（146.34±0.07）％、（127.47±0.09）％；Raji細(xì)胞侵襲率分別為100％、（102.41±0.11）％、（167.50±0.19）％、（134.46±0.13）％。 4.常氧、1％、3％、5％處理24h，K562細(xì)胞HIF-1α蛋白經(jīng)WesternBlot檢測吸光度值分

7、別為0.04±0.01、0.03±0.01、1.04±0，05、0.88±0.23；Raji細(xì)胞HIF-1α蛋白經(jīng)WesternBlot檢測吸光度值分別為0.03±0.02、0.02±0.03、1.81±0.05、1.61±0.1. 5.常氧、1％、3％、5％處理24h，K562細(xì)胞HIF-1αmRNA經(jīng)RT-PCR檢測吸光度值分別為0.08±0.02、0.08±0.02、0.91±0.06、0.66±0.04；Raji細(xì)胞HI

8、F-1αmRNA經(jīng)RT-PCR檢測吸光度值分別為0.10±0.04、0.11±0.07、0.81±0.05、0.65±0.05。 6.常氧、1％、3％、5％處理24h，K562細(xì)胞VEGFmRNA經(jīng)RT-PCR檢測吸光度值分別為0.41±0.03、0.42±0.04、0.72±0.04、0.65±0.03；Raji細(xì)胞VEGFmRNA經(jīng)RT-PCR檢測吸光度值分別為0.38±0.05、0.37±0.06、0.86±0.04、0.

9、76±0.08. 7.常氧、1％、3％、5％處理24h，K562細(xì)胞MMP-9mRNA經(jīng)RT-PCR檢測吸光度值分別為0.52±0.06、0.50±0.06、0.98±0.03、0.87±0.04；Raji細(xì)胞MMP-9mRNA經(jīng)RT-PCR檢測吸光度值分別為0.30±0.04、0.29±0.04、0.80±0.06、0.65±0.05. 8.常氧、1％、3％、5％處理24h，K562細(xì)胞MMP-2mRNA經(jīng)RT-PCR

10、檢測吸光度值分別為0.52±0.06、0.50±0.06、0.98±0.03、0.87+0.04；Raji細(xì)胞MMP-2mRNA經(jīng)RT-PCR檢測未見明顯表達(dá)。 結(jié)論： 1.適度低氧能增強(qiáng)K562細(xì)胞和Raji細(xì)胞的粘附、遷移、侵襲能力。 2.適度低氧可上調(diào)K562細(xì)胞和Raji細(xì)胞HIF-1α蛋白和mRNA的表達(dá)。 3.適度低氧可上調(diào)K562細(xì)胞和Raji細(xì)胞VEGF、MMP-9mRNA的表達(dá)。