齊墩果酸對(duì)白血病細(xì)胞中VEGF表達(dá)的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本研究的目的在于通過(guò)檢測(cè)人白血病細(xì)胞株HL-60、K562在常氧及缺氧條件下并在齊墩果酸的影響下，缺氧誘導(dǎo)因子1 α(HIF-1 α)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、誘導(dǎo)型-氧化氮合酶(iNOS)蛋白及mRNA表達(dá)的變化情況，進(jìn)一步探討它們之間相互關(guān)系。為抗白血病血管新生這一新的治療靶點(diǎn)提供重要的研究依據(jù)。 方法：建立HL-60、K562細(xì)胞體外低氧培養(yǎng)模型。MTT法檢測(cè)不同濃度齊墩果酸對(duì)K562細(xì)胞的生存影響。采用R

2、T-PCR和Western blot分別檢測(cè)齊墩果酸對(duì)常氧及缺氧48小時(shí)后白血病HL-60、K562細(xì)胞HIF-1 α、VEGF和iNOS的mRNA及蛋白的表達(dá)變化。ELISA技術(shù)檢測(cè)齊墩果酸對(duì)常氧及缺氧白血病HL-60、K562細(xì)胞培養(yǎng)液中VEGF含量的影響。 結(jié)果： 1．藥物對(duì)細(xì)胞抑制增殖的作用：采用MTT比色法檢驗(yàn)結(jié)果顯示：同一時(shí)間點(diǎn)不同濃度的OA(40、60、80、100gmol/1)對(duì)K562細(xì)胞的抑制作用，與

3、空白對(duì)照組比較，具有統(tǒng)汁學(xué)意義(P<0.05)：100μmol/l與80μmol/l的約物刈K562細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同一濃度在不同時(shí)間點(diǎn)(12、24、48、72h)K562細(xì)胞的抑制作用與對(duì)照組比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。GA作用K562細(xì)胞72h與48h的抑制率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。OA對(duì)K562細(xì)胞表現(xiàn)增殖抑制效應(yīng)呈時(shí)間、劑量依賴(lài)性，其作用的最適濃度為80μmol/l，最適時(shí)間為48h

4、。 2．半定量RT-PCR法結(jié)果顯示：HIF-1 α、VEGF、iNOS的mRNA在各組都有不同程度的表達(dá)，缺氧組與常氧組比較表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05)，OA處理組與對(duì)照組比較表達(dá)明顯受抑制(P<0.05)齊墩果酸可明顯抑制HIF-1 α、VEGF、iNOS mRNA表達(dá)。應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)法分析HIF-1 α分別和VEGF、iNOSmRNA表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果顯示：在HL-60細(xì)胞中HIF-1 α和VEGFmRNA(

5、Rs=0.87580，P=0.0044)、HIF-1 α和iNOSmRNA(Rs=0.96826，P=0.0001)；在K562細(xì)胞中HIF-1 α和VEGFmRNA(Rs=0.83652，P=0.00963)、HIF-1 α和iNOSmRNA(Rs=0.89123,P=0.0030)可見(jiàn)HIF-1α和VEGF、iNOS基因在轉(zhuǎn)錄水平上具有相關(guān)性。 3. westem blot法結(jié)果顯示：HIF-1α、VEGF、iNOS的蛋白在

6、各組都有不同程度的表達(dá)，缺氧組與常氧組比較表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05)，OA處理組與對(duì)照組比較表達(dá)明顯受抑制(P<0.05)齊墩果酸可明顯抑制HIF-1 α、VEGF、iNOS蛋白表達(dá)。在HL-60細(xì)胞中iNOS和HIF-1 α、HIF-1α和VEGF、iNOS和VEGF蛋白表達(dá)之間均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.98488、0.82713、0.89478(P<0.01)在K562細(xì)胞中iNOS和HIF-1 α、HIF-1 α和VEGF、

7、iNOS和VEGF蛋白表達(dá)之間均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.98354、0.96190、0.96775 (P<0.01)。 結(jié)論：常氧條件下，HL-60、K562細(xì)胞株中HIF-1 α及VEGF、iNOS mRNA和蛋白低表達(dá)。低氧條件下，HL-60、K562細(xì)胞株中HIF-1 α及VEGF、iNOS mRNA和蛋白表達(dá)均顯著增加，與常氧組比較差異有顯著性。在HL-60、K562細(xì)胞株中，HIF-1 α、iNOS、VEGF蛋白的