MicroRNA30c與白血病細(xì)胞阿霉素耐藥性的相關(guān)研究.pdf

1、研究背景:白血病是一類(lèi)造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，因白血病細(xì)胞自我更新增強(qiáng)、增殖失控、分化障礙、凋亡受阻，而停滯在細(xì)胞發(fā)育的不同階段。白血病的治療主要以化療為主，但是化療過(guò)程中往往出現(xiàn)癌細(xì)胞對(duì)藥物的耐藥現(xiàn)象導(dǎo)致治療失敗、腫瘤復(fù)發(fā)。MicroRNA(miR)是一種保守進(jìn)化的小RNA分子，在一些關(guān)鍵的生物過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，如發(fā)育時(shí)序、干細(xì)胞分化、信號(hào)傳導(dǎo)、疾病和腫瘤等。目前有研究顯示microRNA30c(miR-30c)在多種耐藥腫

2、瘤中呈低表達(dá)狀態(tài)，包括紫杉醇、順鉑耐藥的卵巢癌細(xì)胞株和伊馬替尼耐藥的慢性粒細(xì)胞白血病，而miR-30c是否也參與到對(duì)阿霉素耐藥的白血病中尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。所以本課題主要研究miR-30c與白血病阿霉素耐藥的關(guān)系，通過(guò)分析白血病細(xì)胞株和臨床白血病患者骨髓標(biāo)本中miR-30c及其靶基因FANCF的表達(dá)及其相互關(guān)聯(lián)情況，來(lái)研究miR-30c是否參與對(duì)白血病阿霉素耐藥性的調(diào)節(jié)及其分子機(jī)制。
　　目的:探討miR-30c與白血病阿霉素耐藥的關(guān)

3、系及機(jī)制。
　　方法:使用MTT法檢測(cè)白血病細(xì)胞K562、阿霉素耐藥株K562/R和FANCF沉默的K562/R-SH細(xì)胞的耐藥性。實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)K562、K562/R、K562/R-SH細(xì)胞和臨床白血病患者骨髓標(biāo)本中miR-30c和靶基因FANCF mRNA的表達(dá)。Western Blot檢測(cè)K562、K562/R和K562/R-SH細(xì)胞中FANCF蛋白的表達(dá)。彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)K562、K562/R和K562/R-SH細(xì)

4、胞中的DNA損傷。
　　結(jié)果:MTT結(jié)果顯示K562/R細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥性為K562細(xì)胞的26.58倍，F(xiàn)ANCF基因沉默后K562/R細(xì)胞的耐藥性下降44.70％。miR-30c在K562/R細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯低于K562細(xì)胞。FANCF mRNA和蛋白在K562/R細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于K562細(xì)胞。FANCF基因沉默后K562/R細(xì)胞中miR-30c表達(dá)升高。彗星實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示40μM阿霉素處理后K562/R細(xì)胞中DNA