甲基強的松龍促進(jìn)寡突膠質(zhì)前體細(xì)胞遷移的研究.pdf

1、跳躍性神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)依賴于髓鞘結(jié)構(gòu)的形成。髓鞘結(jié)構(gòu)是由分化成熟后的寡突膠質(zhì)細(xì)胞特化出片層結(jié)構(gòu)致密包繞軸突形成的。它對于軸突還具有保護(hù)，營養(yǎng)等功能。髓鞘結(jié)構(gòu)是神經(jīng)系統(tǒng)正常行使功能所必需的成分。
　　 寡突膠質(zhì)細(xì)胞是由寡突膠質(zhì)前體細(xì)胞(oligodendrocyte precursor cells，OPC)發(fā)育而來的。OPC在發(fā)育期經(jīng)過增殖，遷移，分化等發(fā)育階段，最后包繞軸突并形成髓鞘。OPC起源于神經(jīng)系統(tǒng)非常局限的區(qū)域。最早一批O

2、PC在大腦中發(fā)源于腦室下區(qū)(subventricularzone，SVZ)，在脊髓中發(fā)源于運動神經(jīng)元前體區(qū)。之后在很短的時間內(nèi)進(jìn)行長距離遷移，并散布到整個發(fā)育過程中的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervoussystem，CNS)。無論在體內(nèi)還是外培養(yǎng)的條件下，OPC都有很強的運動能力。目前已鑒定出多種影響OPC的遷移因子，但是OPC遷移的具體路徑和分子機制還有很多未知之處。人類存在很多疾病與髓鞘相關(guān)。包括脊髓損傷(spinal co

3、rd injury,SCI)，脫髓鞘病(demyelination disease)，阿爾茲海默氏病等。這些疾病的共同特征是髓鞘丟失。治療此類疾病不僅要減少繼續(xù)損傷，而且要修復(fù)已有的損傷。研究發(fā)現(xiàn)，病人體內(nèi)存在自發(fā)性髓鞘修復(fù)的現(xiàn)象，即再髓鞘化過程。前人已證實，成年人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)仍然存在一定比例的OPC，病理損傷時OPC會被激活，不斷從SVZ準(zhǔn)確遷移到損傷部位。再髓鞘化過程相當(dāng)于重現(xiàn)OPC發(fā)育過程中的各個階段，即遷移，分化和成髓鞘。遷

4、移過程是OPC修復(fù)受損髓鞘最先需要完成的步驟。促進(jìn)OPC的遷移的無疑有助于加速再髓鞘化過程。因此無論從生理發(fā)育的角度還是從病理的角度，研究OPC的遷移過程具有重要的意義。
　　 甲基強的松龍(methylprednisolone，Mep)是臨床治療脊髓損傷和多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)的常用藥。Mep是一種人工合成的糖皮質(zhì)激素的類似物，它作為一種免疫系統(tǒng)的調(diào)質(zhì)，抑制免疫系統(tǒng)的活化和炎癥反應(yīng)，從而減少免

5、疫系統(tǒng)對神經(jīng)系統(tǒng)的攻擊和髓鞘的丟失。給予Mep后癥狀得到緩解是否僅僅由于Mep的免疫抑制作用，Mep對于OPC本身有何種作用，尤其是對于OPC的遷移是否有影響是非常有意義的問題。
　　 本課題的研究證實了Mep以糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor,GR)依賴和激活ERK1/2磷酸化的方式促進(jìn)OPC細(xì)胞的遷移。
　　 本研究的主要結(jié)果如下：
　　 1.體外純化培養(yǎng)OPC。培養(yǎng)的細(xì)胞顯示所

6、純化出的細(xì)胞與文獻(xiàn)報道一致，典型OPC呈雙極狀態(tài)，表達(dá)OPC的分子標(biāo)記NG2，A285，并可分化為O4陽性，O1陽性或MBP陽性等不同階段的寡突膠質(zhì)譜系細(xì)胞。
　　 2.Mep促進(jìn)OPC的遷移。利用Transwell檢測發(fā)現(xiàn)100nM、1μM的Mep對OPC的遷移有顯著促進(jìn)作用。Matri膠遷移實驗?zāi)Ｐ妥C實，1μM濃度的Mep處理細(xì)胞球后，遷出的細(xì)胞數(shù)量顯著增多。
　　 3.Mep對OPC的增殖沒有影響。BrdU摻入實驗

7、顯示，摻入BrdU4小時的OPC的BrdU陽性率在30％左右，不隨Mep的加入而改變。
　　 4.OPC表達(dá)糖皮質(zhì)激素受體。用RT-PCR，Western-blot和免疫細(xì)胞化學(xué)染色均可以檢測到糖皮質(zhì)激素受體的表達(dá)。
　　 5.Mep促進(jìn)OPC遷移的作用是糖皮質(zhì)激素受體依賴的。Transwell遷移模型中，GR拮抗劑Ru38486可以阻斷Mep對OPC的促遷移作用。GR的內(nèi)源性配體皮質(zhì)酮，具有與Mep同樣的促進(jìn)OPC遷移