整合素靶向性納米磁性對比劑體外顯像人肝癌細(xì)胞的實驗研究.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我國最常見的惡性腫瘤之一，由于起病隱匿，目前尚缺乏有效的早期診斷方法，確診時往往已到晚期或發(fā)生轉(zhuǎn)移。因此肝癌的早期診斷對患者的治療及預(yù)后有重要意義。近年來，探索惡性腫瘤早期診斷策略的過程中，靶向診斷尤其是分子影像技術(shù)備受重視。在分子影像實施過程中，較為關(guān)鍵環(huán)節(jié)在于成像靶點的選擇和高效特異性分子探針的合成。αvβ3整合素受體等在正常肝細(xì)胞中檢測不出，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生癌

2、變時，細(xì)胞表面的αvβ3整合素受體會有較大改變；環(huán)狀RGD多肽是一種含有精氨酸(arginine)、甘氨酸(glycine)和天冬氨酸(aspartic acid)序列的小肽，可以特異性識別整合素αvβ3受體。cRGD/αvβ3的靶向投遞系統(tǒng)在分子成像研究中備受關(guān)注。本文擬構(gòu)建 cRGDfK-SPIO靶向性探針，并探討其在αvβ3整合素受體表達(dá)陽性的肝癌細(xì)胞的分子靶向診斷中的價值及意義。
　　目的:構(gòu)建環(huán)狀精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸

3、多肽(cRGDfK)超順磁氧化鐵納米磁共振分子探針，以顯示高表達(dá)整合素αvβ3受體的人肝癌 HepG2細(xì)胞。
　　方法:1、用生物相容性多孔聚合SPIO微球（BIO-r-C-d）的羧基端與cRGDfK的氨基端化學(xué)偶聯(lián)，應(yīng)用激光納米粒度儀測試空白對比劑及多肽對比劑的粒徑及zeta電位；應(yīng)用十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳及磁共振掃描儀檢測抗體對比劑的生化及磁學(xué)特性；2、用免疫熒光化學(xué)方法檢測 HepG2細(xì)胞αVβ3整合素受體表達(dá)情況

4、；將 cRGDfK-SPIO、SPIO分別與HepG2細(xì)胞孵育，行普魯士藍(lán)染色顯示鐵顆粒；3、肝癌細(xì)胞在含有0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml不同濃度cRGDfK-SPIO對比劑的細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后行磁共振成像，找出最佳成像濃度；4、細(xì)胞在37℃，最佳成像濃度的cRGDfK-SPIO對比劑組，SPIO組，及空白細(xì)胞對照組分別孵育24h后進(jìn)行磁共振掃描。
　　結(jié)果:1、

5、激光納米粒度儀，十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳分析證明SPIO與cRGDfK多肽有效結(jié)合在一起，多肽對比劑的活性及弛豫率未發(fā)生明顯變化；2、免疫細(xì)胞熒光檢測HepG2細(xì)胞中αvβ3整合素受體高度表達(dá)；普魯士藍(lán)染色法證明多肽對比劑可與 HepG2細(xì)胞結(jié)合。3、肝癌細(xì)胞在不同濃度cRGDfK-SPIO對比劑中培養(yǎng)24h后，各組之間的T2弛豫時間數(shù)值行方差分析，F(xiàn)值為336.389（P<0.01），然后，各實驗組與對照組行Dunnett-t

6、檢驗，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），且20μg/ml組T2弛豫時間最低。4、20μg/ml鐵濃度的cRGDfK-SPIO與 HepG2細(xì)胞孵育后T2弛豫時間下降至261.3ms，SPIO組和對照組T2弛豫時間無明顯下降。
　　結(jié)論:cRGDfK-SPIO對αvβ3整合素受體具有較好靶向作用，可通過MRI顯示高表達(dá)整合素αvβ3受體 HepG2細(xì)胞。本研究所制備的cRGDfK-SPIO對比劑在HepG2細(xì)胞的最佳成像濃度是20