整合素αvβ3反義基因治療肝細胞性肝癌的實驗研究.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文整合素αvβ3反義基因治療肝細胞性肝癌的實驗研究姓名：徐宗珍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（普通外科）指導(dǎo)教師：李杰20050513山東大學(xué)碩士學(xué)位論文整合素avl33反義基因治療肝細胞性肝癌的實驗研究碩士研究生：徐宗珍導(dǎo)師：李杰副教授中文摘要目的：原發(fā)性肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其組織學(xué)類型主要為肝細胞型肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)，約占90％以上目前的諸多研究已明確血管生成

2、和腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)。肝癌是富血管性腫瘤，其高血供、高轉(zhuǎn)移、高復(fù)發(fā)的特點提示人們血管生成在肝癌的惡性生物學(xué)行為中扮演著十分重要的角色研究發(fā)現(xiàn)，整合素av83不僅在多種實體腫瘤細胞表面有高水平的表達，而且在腫瘤組織新生血管內(nèi)皮細胞有強烈表達D2I因此，選擇整合素avB3的反義基因、單克隆抗體或者拮抗肽，來治療腫瘤的實驗是近年腫瘤研究的一個熱點。本實驗旨在研究整合素Qv133反義基因治療裸鼠皮下種植性肝癌的療效，以及對盱癌血管生成及細

3、胞凋亡的影響，進一步探討整合素av133在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用，為肝癌的治療提供新的思路。方法：將av133反義基因表達載體AlphaV，pcDNA3、Beta31pcDNA3轉(zhuǎn)入感受態(tài)細菌，細菌擴大培養(yǎng)，質(zhì)粒大提后酶切鑒定。46周齡雄性裸鼠120只，隨機分為4組。每組30只，體重18184克。裸鼠皮下接種肝癌細胞系HepG2，建立肝癌模型采用Fugene6轉(zhuǎn)染試劑，瘤內(nèi)注射方法，每組分別用av、p3及avp3的反義基因進行基因治療(

4、對照組注射空殼質(zhì)粒)，觀察腫瘤生長情況，記錄腫瘤大小6周后切取腫瘤秤重，計算抑瘤率采用免疫組織化學(xué)SP法分別檢測dV、B3蛋白以及CD31、VEGF的表達，計數(shù)微血管密度(microvesseldensity。MVD)。采用TUNEL法(TdTmediatedbiotinylateddUTPnickendlablingmethod)檢測各組的細胞凋亡情況，并計算凋亡指數(shù)(apoptosisindex，AI)。并對各組間dV、133蛋白以