整合素αVβ3反義基因治療大鼠胰腺癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：胰腺癌是一種兇險(xiǎn)的惡性腫瘤，發(fā)病率有逐年上升趨勢，近30年來發(fā)病率己增長3～7倍。其血供豐富，靜脈和淋巴引流途徑較多，腫瘤生長迅速，易侵犯周邊器官及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，單一化療或放療效果不理想，所以針對易侵襲因素的靶向治療將可能提高胰腺癌的治愈率及改善預(yù)后。腫瘤血管生成不僅與腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而且在腫瘤病理分級、治療和預(yù)后判斷上具有重要的評估價(jià)值。研究表明，細(xì)胞粘附分子介導(dǎo)的細(xì)胞粘附行為異常在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中有重要作用。近年，隨著

2、免疫和分子生物學(xué)的發(fā)展，腫瘤血管生成及抗血管生成逐漸成為腫瘤研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)之一，細(xì)胞粘附分子與血管生成的關(guān)系也日益受到關(guān)注<'[2]>。研究發(fā)現(xiàn)，整合素αV β3不僅在多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞表面不同水平的表達(dá)，而且在血管內(nèi)皮細(xì)胞不同程度的表達(dá)α Vβ 3、α V β5、β1、α 3、α 2、α 6、β4等<'[3]>。因此，選擇整合素α V β3的反義基因、單克隆抗體或者拮抗肽，來治療腫瘤的實(shí)驗(yàn)是近年腫瘤研究的一個(gè)熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)旨在研究整合素

3、αV β3反義基因治療大鼠胰腺癌的療效，以及對胰腺癌血管生成及細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)一步探討整合素α V β3在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用，為胰腺癌的治療提供新的思路。 方法：把αV β3反義基因表達(dá)載體AlphaV/pcDNA3、Beta3/pcDNA3轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)菌，細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)，質(zhì)粒大提后酶切鑒定。4周齡雄性大鼠120只，隨機(jī)分為4組，每組30只。大鼠胰腺被膜下包埋二甲基苯葸線結(jié)，建立胰腺癌模型。6周后病例證實(shí)成瘤，并采用瘤內(nèi)注射

4、質(zhì)粒電轉(zhuǎn)染方法，每組分別用α V、β3及αV β3的反義基因進(jìn)行基因治療(對照組注射空殼質(zhì)粒)，觀察腫瘤生長情況，記錄腫瘤大小。6周后切取腫瘤秤重，計(jì)算抑瘤率。采用免疫組織化學(xué)S-P法分別檢測α V、β3蛋白以及的表達(dá)，計(jì)數(shù)微血管密度(microvessel density，MVD)。采用 TUNEL 法 (TdT-mediated biotinylated-dUTP nick end labling method)檢測各組的細(xì)胞凋亡情

5、況，并計(jì)算凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)。并對各組間αV、β3蛋白以及MVD、AI進(jìn)行比較。 結(jié)果：(1)各組腫瘤體重有明顯差異，對照組，αV，β3及αV β3組瘤重分別為1.167±0.79g，0.953±0.26g，1.013±0.42g，0.788±0.56g。αV、β3及αV β3組與對照組比較有明顯差異(P<0.01)；αV β3組與αV組和β3組比較有差異(P<0.05)。αV、β3及αVβ3組的抑

6、瘤率分別為17.909﹪，13.196﹪，32.476﹪。 (2)αV、β3蛋白在實(shí)驗(yàn)組及對照組中均有表達(dá)，對照組13例中有12例表達(dá)陽性，陽性率為92.31﹪，αV組、β3組的表達(dá)率為76.92﹪、80.00﹪，與對照組比較陽性分布有差異(P<0.01)。 (3) 對照組、αV組、β3組、αV β3組微血管密度計(jì)數(shù)分別為18.333±1.398、13.800±1.063、15.967±1.245、12.66±1.234

7、，實(shí)驗(yàn)組與對照組比較有顯著差異(19<0.01)；αV β3組與αV組和β3組比較有差異(P<0.05)。 (4)細(xì)胞的凋亡指數(shù)(AI)對照組、αV組、β3組、αV β3組分別為12.300±1.393﹪， 22.167±1.234﹪，20.367±1.066﹪，24.100±0.995﹪，αV組、β3組、αV β3組與對照組比較有極顯著差異(P<0.01)；αV β3組與αV組和β3組組間比較比較有差異(P<0.05)。