反義缺氧誘導(dǎo)因子-1α治療胰腺癌及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胰腺癌是人體最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其患病率在世界范圍呈上升趨勢(shì)。胰腺癌由于惡性程度高、手術(shù)切除率低、早期診斷困難，治療的效果不盡人意。近年來(lái)各種手術(shù)方式的改進(jìn)以及化療、放療方案等綜合措施的引進(jìn)，手術(shù)并發(fā)癥和死亡率有所降低，但5年生存率仍提高不多。隨著免疫和分子生物學(xué)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制研究的不斷深入，為胰腺癌的治療提供了新的希望。 近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，缺氧是影響化療效果而且干擾了腫瘤對(duì)放療的反應(yīng)的一個(gè)重要因素。胰腺癌血供很差，在

2、嚴(yán)重缺氧時(shí)還能繼續(xù)增殖的原因可能在于持續(xù)缺氧的狀態(tài)誘導(dǎo)了胰腺癌中缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α的表達(dá)。研究表明，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和糖酵解過(guò)程中多種關(guān)鍵酶基因都是受HIF-1α調(diào)控的，HIF-1α通過(guò)促進(jìn)腫瘤組織的血管生成和能量代謝加速腫瘤組織的生長(zhǎng)，同時(shí)也促進(jìn)了腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。HIF-1α在胰腺癌中廣泛表達(dá)，對(duì)胰腺癌的血管生成、發(fā)生發(fā)展起到了很大的作用。而已有實(shí)驗(yàn)表明，人類(lèi)凋亡抑制蛋白(humaninhibitorofapo

3、ptosisprotein，hIAP)家族成員之一survivin在胰腺癌中高表達(dá)，且與化療敏感性有關(guān)；整合素家族中β1-integrin在胰腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程中也起著重要的作用。 本研究旨在觀察反義HIF-1α對(duì)胰腺癌生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、化療敏感性的影響及其與survivin、β1-integrin的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)共分為以下四部分。 第一部分 缺氧誘導(dǎo)因子-1α在胰腺癌中的表達(dá)和意義 目的 本研究旨在檢測(cè)

4、胰腺癌中缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)的表達(dá)，探討HIF-1α的表達(dá)與臨床特征的關(guān)系，從而深入探討其在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 結(jié)論 1.HIF-1α在胰腺癌中高度表達(dá)，在癌旁胰腺組織未見(jiàn)表達(dá)，可能與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展或與治療效果有關(guān)，但其具體作用及作用機(jī)制均有待進(jìn)一步深入的研究。 2.HIF-1α與胰腺癌患者預(yù)后的密切相關(guān)。 第二部分 重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/反義HIF-1α的構(gòu)建

5、及其在人胰腺癌細(xì)胞株BxPc-3中的穩(wěn)定表達(dá) 目的 第一部分顯示，胰腺癌高表達(dá)HIF-1α蛋白，本部分?jǐn)M構(gòu)建HIF-1α基因的反義表達(dá)核苷酸，經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人胰腺癌細(xì)胞株BxPc-3，建立穩(wěn)定表達(dá)反義HIF-1α基因的細(xì)胞模型，為反義封閉治療奠定基礎(chǔ)。 結(jié)論 1.本研究成功構(gòu)建了HIF-1α的反義核苷酸，與預(yù)期結(jié)果符合。 2.經(jīng)脂質(zhì)體途徑轉(zhuǎn)染BxPc-3細(xì)胞，該反義核苷酸能夠抑制HIF-1α的表達(dá)。

6、 3.該反義核苷酸的成功構(gòu)建為下一步實(shí)驗(yàn)研究奠定了基礎(chǔ)。 第三部分 反義HIF-1α增加化療藥物敏感性的實(shí)驗(yàn)研究 目的 本研究擬利用構(gòu)建的反義HIF-1α，轉(zhuǎn)染BxPc-3細(xì)胞后，觀察BxPc-3細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性的變化及其與survivin的關(guān)系。 結(jié)論 轉(zhuǎn)染反義HIF-1α基因可明顯增強(qiáng)氟尿嘧啶，阿霉素，吉西他賓對(duì)胰腺癌細(xì)胞的殺傷力，并伴有survivin表達(dá)量的明顯下調(diào)，這

7、表明反義HIF-1α可能通過(guò)阻斷survivin的表達(dá)而增強(qiáng)胰腺癌對(duì)化療的敏感性，因此，阻斷HIF-1α的表達(dá)可望成為胰腺癌基因治療的新途徑。 第四部分 反義HIF-1α對(duì)胰腺癌生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移影響的實(shí)驗(yàn)研究 目的 本研究擬利用構(gòu)建的反義HIF-1α，轉(zhuǎn)染BxPc-3細(xì)胞后，觀察其對(duì)胰腺癌生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的影響及其與β1-integrin的關(guān)系。 結(jié)論 轉(zhuǎn)染反義HIF-1α基因可明顯抑制胰腺癌細(xì)胞的侵