DNA MTase反義基因逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞惡性表型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的用構(gòu)建的反義DNAMTase基因片段真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系SMMC-7721,以空SMMC-7721細(xì)胞作為空白對照,以轉(zhuǎn)染正義DNAMTase基因片段真核表達(dá)載體的SMMC-7721細(xì)胞作為陰性對照,觀察肝癌細(xì)胞內(nèi)源性DNA MTase基因mKNA表達(dá)的變化、E-Cadherin基因啟動子區(qū)域甲基化狀態(tài)改變、抑癌基因E-Cadherin mRNA和蛋白表達(dá)的變化及肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的改變,探討DNA甲基化異常、抑癌基因、肝細(xì)胞

2、癌間的相關(guān)性,分析肝細(xì)胞癌發(fā)生機(jī)理,探討肝癌治療的新方法. 方法分別將ECoR Ⅰ /Xho Ⅰ、EcoR Ⅰ /Xba Ⅰ酶切位點(diǎn)添加于擴(kuò)增產(chǎn)物長度為353bp和193bp的PCR引物5端,進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增,得到正、反義人DNA MTase基因片段,產(chǎn)物用相應(yīng)內(nèi)切酶切割后分別定向連入質(zhì)粒載體pCl-neo的Xho Ⅰ /EcoRⅠ、ECoRⅠ/Xba Ⅰ克隆位點(diǎn)上,然后將構(gòu)建成的正、反義重組載體進(jìn)行酶切鑒定和測序確認(rèn). 結(jié)論DNA