腦膠質(zhì)瘤整合素αvβ3分子顯像及其評(píng)價(jià)抗血管靶向治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分新型整合素αvβ3受體示蹤劑99Tcm標(biāo)記RGD環(huán)肽二聚體腫瘤顯像和評(píng)價(jià)血管靶向治療的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:
　　 跨膜二聚體整合素αvβ3在多種腫瘤細(xì)胞和腫瘤新生血管高表達(dá)，成為近年關(guān)注的腫瘤研究靶點(diǎn)。整合素αvβ3能與含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)序列的RGD多肽特異性結(jié)合。在本研究中，我們用99Tcm標(biāo)記包含2個(gè)PEG4的RGD環(huán)肽二聚體HYNIC-2PEG4-Dimer(Dimer:

2、E[c(RGDfK)]2)，以神經(jīng)膠質(zhì)瘤為研究模型，挑選新型腫瘤抗血管生成藥物恩度進(jìn)行治療，研究新探針作為整合素αvβ3顯像劑的可行性，并觀察恩度對(duì)標(biāo)記探針在荷U87MG神經(jīng)膠質(zhì)瘤裸鼠體內(nèi)生物學(xué)分布及γ顯像的影響。
　　 方法:
　　 制備99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer。選取整合素αvβ3表達(dá)陽性的人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U87MG)株，免疫熒光檢測(cè)U87MG細(xì)胞經(jīng)恩度處理后整合素αvβ3的表達(dá)情況。建立荷U8

3、7MG神經(jīng)膠質(zhì)瘤裸鼠模型，將荷瘤裸鼠分為兩組，實(shí)驗(yàn)組給予200μL重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞抑制素注射液（恩度，15mg/3ml/支），對(duì)照組給予同等劑量的生理鹽水；6小時(shí)后，注射示蹤劑99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer，評(píng)價(jià)示蹤劑在兩組荷瘤裸鼠體內(nèi)的生物學(xué)分布，并γ顯像。采用非配對(duì)t檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:
　　 放射性層析掃描儀結(jié)果顯示，99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer的放化純大于

4、95％。U87MG細(xì)胞高表達(dá)整合素αvβ3，經(jīng)恩度處理后，整合素αvβ3表達(dá)逐漸減低，至劑量為400μg/mL時(shí)，表達(dá)程度最低。荷瘤裸鼠注射示蹤劑90min后，生物學(xué)分布結(jié)果顯示，腫瘤組織有較高攝取，給予恩度作用后，腫瘤攝取率減低，兩組腫瘤攝取率分別為6.27±0.33%ID/g和1.50±0.08%ID/g。γ顯像結(jié)果顯示恩度組與生理鹽水組T/NT比值分別為1.02±0.11和2.58±0.36（t=10.25，P＜0.05）。免疫組

5、化結(jié)果顯示：經(jīng)恩度處理后腫瘤組織整合素αvβ3表達(dá)減少，兩組αvβ3陽性表達(dá)率分別為81.5±3.2%與33.1±2.7%(t=32.6，P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 示蹤劑99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer制備簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好。U87MG及荷瘤裸鼠腫瘤組織高表達(dá)整合素αvβ3，且特異性攝取99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer。99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer是一個(gè)非常有前景的用

6、于整合素αvβ3陽性腫痛診斷的顯像劑。99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer可能用于監(jiān)測(cè)恩度的治療效果，有望用來篩選恩度治療病例。整合素途徑可能是恩度發(fā)揮抗血管形成作用的機(jī)制之一。
　　 第二部分恩度對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療效果的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:
　　 由于惡性腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤血管生成，血管形成抑制劑成為治療腫瘤的一個(gè)新的途徑和手段。恩度是第一個(gè)進(jìn)入臨床試驗(yàn)的內(nèi)源性血管形成抑制劑，大量的多中心臨床

7、實(shí)驗(yàn)證實(shí)其可以抑制實(shí)體瘤的生長(zhǎng)，降低腫瘤轉(zhuǎn)移，但有關(guān)恩度對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)是否同樣有效，相關(guān)研究報(bào)道較少。在本研究中，我們選取神經(jīng)膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型為研究對(duì)象，觀察短期內(nèi)中小劑量恩度對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤腫瘤生長(zhǎng)、血管新生及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、整合素αvβ3（integrinαβ3）表達(dá)情況的影響。
　　 方法:
　　 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人神經(jīng)膠質(zhì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87MG，接種于裸鼠右腋部皮下，接種后約4天出現(xiàn)肉眼可見的腫瘤，模型建立成功。

8、待接種腫瘤長(zhǎng)至直徑約0.8cm后，將其分成兩組，實(shí)驗(yàn)組每日給予恩度稀釋液200μL(10mg/kg)，對(duì)照組給予同等劑量生理鹽水，連續(xù)給藥14天，隔日測(cè)量裸鼠體重及腫瘤體積。用CD34作為血管標(biāo)記物，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腫瘤的微血管密度(MVD)、腫瘤中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、整合素αβ3（integrinαvβ3）的表達(dá)情況。采用非配對(duì)t檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，恩度組、生理

9、鹽水組裸鼠體重平均值分別為21.99±0.71g、22.32±0.85g（t=0.85，P＞0.05）；兩組裸鼠腫瘤體積的平均值依次為0.71±0.67cm3、1.71±0.12cm3(t=16.2，P＜0.05)。以CD34作為血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物，血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿被染成棕黃色，兩組裸鼠腫瘤MVD平均值分別為22.15±1.22和58.59±1.16(t=61.24，P＜0.05)，VEGF的表達(dá)率為32.0±2.3%與80.8±8